泪腺腺样囊性癌患者中GFRα-1/RET的异常表达与高复发风险相关:51例LACC的回顾性研究

Aberrantly expressed GFRα-1/RET in patients with lacrimal adenoid cystic carcinoma is associated with high recurrence risk: a retrospective study of 51 LACC cases.

作者信息Lin Liu, Liqiong Zhao, Jie Zhang, Guoxiang Song, Carol L Shields, Ruihua Wei
PMID33628594
发布时间2021-02-15
DOI10.20892/j.issn.2095-3941.2020.0271

实验完整度

包含51例LACC患者的回顾性队列分析,结合H&E染色评估PNI和免疫组化检测GDNF/GFRα-1/RET表达,并进行了细胞增殖实验(MTT)和Western blot验证,但机制研究较浅,功能实验验证有限。

主要模型

LACC患者队列(51例) ACC-2细胞系

重点核对

PNI评估:H&E染色,由两名病理学家盲法审查 免疫组化检测GDNF、GFRα-1、RET的表达(使用特定抗体及稀释度) 蛋白表达与复发及PNI的关联分析(卡方检验) GDNF处理ACC-2细胞后增殖变化(MTT法) GFRα-1在GDNF处理后的表达变化(Western blot)

摘要

目的:鉴于泪腺腺样囊性癌(LACC)预后不良,我们旨在研究神经周围浸润(PNI)及随之而来的GDNF/GFRα-1/RET蛋白表达异常对LACC复发的影响。方法:对2001年至2017年间入组的51例经组织学确诊的LACC患者的临床病理资料进行回顾性分析。采用苏木精-伊红染色评估PNI。对LACC福尔马林固定石蜡包埋标本进行基于组织的免疫组织化学(IHC)检测GDNF、GFRα-1和RET蛋白。我们生成了IHC结果的半定量数据,并将其与51例患者的临床病理数据进行比较。结果:51例患者中,19例(37.3%)PNI阳性。伴有PNI的LACC比无PNI者更常见复发(73.7% vs. 37.5%,P = 0.01)。GDNF、GFRα-1和RET蛋白在51例LACC患者中的表达率分别为62.7%、62.7%和54.9%。三种蛋白的表达在伴有PNI的患者中比无PNI者更常见。与之前的发现一致,经IHC检测的PNI相关的GFRα-1和RET阳性仍然与复发显著相关,而经IHC检测的GDNF表达与LACC复发无关。具体而言,同时表达GFRα-1和RET的患者可能具有高PNI风险(阳性率89.5%)和高复发风险(阳性率84.2%)。结论:PNI可能导致LACC复发。经IHC检测的GFRα-1和RET蛋白的共表达可能潜在地与LACC的PNI和复发相关。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
神经周围浸润(PNI)是否与泪腺腺样囊性癌(LACC)的复发相关,以及GDNF/GFRα-1/RET蛋白表达异常是否参与其中。
核心机制
PNI可能通过GDNF信号通路(涉及GDNF、GFRα-1和RET)促进LACC的神经浸润和复发,其中GFRα-1和RET的共表达与高PNI和复发风险显著相关。
主要证据
基于51例LACC患者的回顾性队列,通过H&E染色评估PNI,免疫组化检测GDNF、GFRα-1和RET表达;发现PNI阳性患者复发率高(73.7% vs 37.5%,P=0.01),GFRα-1/RET共表达者PNI阳性率89.5%,复发率84.2%。
研究意义
该研究首次通过免疫组化检测LACC肿瘤中这三种蛋白的表达,并确定其与临床数据的关联,提示GFRα-1/RET的IHC检测可能作为预测LACC复发的有效方法,但机制研究仍需深入。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

患者队列与病理评估

评估LACC患者中PNI与其复发的关联。

回顾性分析51例LACC患者的临床病理数据,通过H&E染色评估神经周围浸润。

2

免疫组化检测蛋白表达

检测GDNF、GFRα-1和RET在LACC组织中的表达,并分析其与PNI和复发的相关性。

对FFPE组织切片进行免疫组化染色,使用特定抗体检测GDNF、GFRα-1和RET,并进行半定量分析。

3

细胞增殖实验(MTT)

验证GDNF对ACC-2细胞增殖的影响。

将ACC-2细胞铺板并培养,使用MTT法检测GDNF处理后的细胞增殖。

4

Western blot分析

验证GDNF处理对GFRα-1蛋白表达的影响。

提取细胞总蛋白,通过Western blot检测GFRα-1的表达。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

验证样本或模型特征
验证细胞功能变化
验证分子表达变化
数据分析与统计

产品清单

实验环节名称品牌货号
GDNF抗体BOAO Biological Engineering Co.BA0890
GFRα-1抗体Bioss Biological TechnologyBS-0201R
RET抗体Boster Biological TechnologyBA1385
RPMI 1640培养基----
胎牛血清----
MTT试剂----
TRIzol试剂Invitrogen--
PCR试剂盒Sangon BiotechB639295
RIPA裂解液----
PVDF膜----

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
患者队列与病理评估
PNI评估标准:H&E染色显示肿瘤细胞环形或部分环形侵犯神经鞘,或肿瘤通过神经纤维生长;切片由两名病理学家盲法审查
阅读提示:Materials and methods - Patients and pathology; Figure 1
免疫组化
FFPE切片厚度:5 µm;一抗浓度:1:100;DAB染色检测信号
阅读提示:Materials and methods - Immunohistochemistry
细胞增殖实验
细胞系:ACC-2;培养条件:RPMI 1640 + 10% FBS,37 °C,5% CO2;细胞密度:2000细胞/孔(96孔板);MTT浓度:5 μg/ml;孵育时间:4小时
阅读提示:Materials and methods - Cell proliferation assays
Western blot
蛋白提取:RIPA缓冲液;封闭:5%脱脂牛奶60分钟
阅读提示:Materials and methods - Western blot
统计设计
卡方检验,双侧P值<0.05为显著
阅读提示:Materials and methods - Statistical analysis