建立小鼠后肢淋巴切除模型
评估手术切除腹股沟淋巴结及邻近淋巴管对后肢淋巴血管化的影响。
对小鼠进行左侧腹股沟淋巴结切除术,对照组不进行手术。
Vascular endothelial growth factor C treatment for mouse hind limb lymphatic revascularization.
包含体内动物模型、免疫组化、体视学、qPCR验证,但缺乏体外或分子机制层面的多重证据。
Balb/C雄性小鼠后肢模型
切除左侧腹股沟淋巴结及邻近淋巴管 外源性VEGFC(Cys156Ser)腹腔注射0.1 mg mL-1,术后1、5、7、15天 在术后3、9、15、30天处死小鼠 评估LHL近端、中部、远端三个区域的Vv和Lv qPCR检测VEGFC和VEGFR3基因表达
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估手术切除腹股沟淋巴结及邻近淋巴管对后肢淋巴血管化的影响。
对小鼠进行左侧腹股沟淋巴结切除术,对照组不进行手术。
验证外源性VEGFC是否能促进淋巴血管重建。
对切除淋巴结的小鼠腹腔注射外源性VEGFC(Cys156Ser),浓度0.1 mg mL-1,在术后1、5、7和15天给药。
定量评估后肢不同区域(近端、中部、远端)的淋巴管密度(Vv)和长度(Lv)。
采集后肢皮肤和肌肉组织,固定、包埋、切片,进行VEGFC和VEGFR3免疫组化染色,然后使用体视学方法分析淋巴管。
检测后肢不同区域VEGFC和VEGFR3的mRNA表达水平。
从后肢组织提取RNA,进行qPCR分析VEGFC和VEGFR3基因表达,使用β-actin作为内参。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 药物处理 | VEGFC(Cys156Ser) | R&D Systems Inc. | -- |
| 免疫组织化学 | 抗VEGFC抗体 | Bioss Inc. | bs-1586R |
| 抗VEGFR3抗体(E-3) | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-514825 | |
| qPCR | TaqMan探针和引物 | Life Technologies | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | Balb/C雄性小鼠,2月龄,体重约20g;手术切除左侧腹股沟淋巴结;对照组未手术 阅读提示:实验设计部分 |
| VEGFC治疗 | VEGFC剂量0.1 mg mL-1,腹腔注射,术后1、5、7、15天给药 阅读提示:实验设计部分 |
| 组织采集和固定 | 采集左侧后肢近端、中部、远端区域的皮肤和肌肉组织;4%中性福尔马林固定用于免疫组化;液氮速冻后-80°C保存用于qPCR 阅读提示:实验设计部分 |
| 免疫组化 | VEGFC抗体稀释度1:400,VEGFR3抗体稀释度1:200;阴性对照使用IgG;阳性对照为大鼠肝脏 阅读提示:免疫组织化学部分 |
| 体视学分析 | 使用Stepanizer软件;每只动物每个区域15张5μm切片;Vv = Pp/PT;Lv = 2(N/AT) 阅读提示:体视学部分 |
| qPCR | 使用TaqMan探针:VEGFC (Mm01202432_m1),VEGFR3 (Mm00433354_m1),β-actin (Mm00607939_s1);内参基因β-actin 阅读提示:qPCR部分 |
| 统计分析 | 数据正态分布;使用单因素方差分析和Tukey-Kramer事后检验比较多组;使用学生t检验比较两组;显著性水平P < 0.05 阅读提示:统计分析部分 |