建立高脂血症动物模型
模拟高脂饮食诱导的高胆固醇血症状态。
雄性SD大鼠随机分为6组,正常组喂食对照饮食,其余各组喂食高脂饮食(含标准饲料82%、猪油10%、胆固醇1%、胆酸盐1%和蛋黄粉5%)5周。
Effects of mulberry leaf on experimental hyperlipidemia rats induced by high-fat diet.
包含动物模型(SD大鼠)及生化、病理、免疫组化和蛋白质印迹等分子验证,但缺乏体外或临床样本的独立验证层级。
高脂饮食诱导的高脂血症SD大鼠模型
桑叶剂量:0.9、0.6、0.3 g/kg 给药方式:每日口服灌胃 处理时间:5周 动物分组:正常对照组、模型组、阿托伐他汀组、三个桑叶组,每组n=8 主要检测指标:血清TC、TG、LDL-C、HDL-C、AST、ALT;肝脏和粪便TC、TBA;肝脏蛋白表达
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
模拟高脂饮食诱导的高胆固醇血症状态。
雄性SD大鼠随机分为6组,正常组喂食对照饮食,其余各组喂食高脂饮食(含标准饲料82%、猪油10%、胆固醇1%、胆酸盐1%和蛋黄粉5%)5周。
评估桑叶对高脂饮食大鼠血脂及相关指标的影响,并比较阳性对照药物。
正常和模型组灌胃蒸馏水,阿托伐他汀组灌胃6.0 mg/kg阿托伐他汀,桑叶组分别灌胃0.9、0.6、0.3 g/kg桑叶,每日一次,持续5周。
评估桑叶对血脂水平及肝功能的改善作用。
采集大鼠腹主动脉血,分离血清,用全自动生化分析仪检测TC、TG、HDL-C、LDL-C、AST、ALT。制备肝脏匀浆,用ELISA试剂盒检测肝组织TC、TG和TBA水平。
评估桑叶对胆固醇和胆汁酸粪便排泄的影响。
收集粪便样本,干燥后用无水乙醇超声提取,离心分离上清,用ELISA试剂盒测定TC和TBA水平。
观察桑叶对肝脏病理变化和脂质蓄积的改善作用。
肝组织固定、包埋、切片,进行H&E染色和油红O染色,在光学显微镜下观察病理变化和脂滴积累。
确定SR-BI和LDL-R在肝脏中的表达位置。
肝组织切片进行免疫组化染色,使用SR-BI和LDL-R一抗孵育,二抗和DAB显色,光学显微镜下观察棕色阳性区域。
定量分析胆固醇吸收、转化和排泄相关蛋白的表达水平。
提取肝脏总蛋白,经SDS-PAGE电泳、转膜、封闭,与一抗和二抗孵育,ECL显色,以GAPDH为内参定量蛋白表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 药物处理 | 桑叶粉 | Shaoxing Royal Tea Village Co., Ltd. | -- |
| 药物处理(阳性对照) | 阿托伐他汀 | China Meheco Group Co., Ltd. | -- |
| 高脂饮食诱导 | 高脂饮食 | Trophic Animal Feed High-tech Co., Ltd. | -- |
| 生化分析 | 总胆固醇生化检测试剂盒 | Medicalsystem Biotechnology Co., Ltd | 15110401 |
| 甘油三酯生化检测试剂盒 | Medicalsystem Biotechnology Co., Ltd | 15090101 | |
| 高密度脂蛋白胆固醇生化检测试剂盒 | Medicalsystem Biotechnology Co., Ltd | 15091401 | |
| 低密度脂蛋白胆固醇生化检测试剂盒 | Medicalsystem Biotechnology Co., Ltd | 15100703 | |
| 天冬氨酸氨基转移酶生化检测试剂盒 | Medicalsystem Biotechnology Co., Ltd | 15092901 | |
| 丙氨酸氨基转移酶生化检测试剂盒 | Medicalsystem Biotechnology Co., Ltd | 15092401 | |
| 甘油三酯酶联免疫吸附测定试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | 15090101 | |
| 总胆固醇酶联免疫吸附测定试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | 20151127 | |
| 总胆汁酸酶联免疫吸附测定试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | 20151128 | |
| 全自动血液生化分析仪 (TBA-40FR) | Toshiba Medical Systems Corporation | TBA-40FR | |
| PowerWave 340 酶标仪 | BioTek Instruments, Inc. | -- | |
| 粪便处理 | 超声波仪 (KQ-500DE) | Kunshan Ultrasonic Instruments Co., Ltd. | KQ-500DE |
| 病理染色 | 油红O | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | WSIG20100803 |
| Harris苏木素 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | 20151216 | |
| 显微镜观察 | 光学显微镜 (B5-223IEP) | Motic China Group Co., Ltd. | B5-223IEP |
| 免疫组化 | SR-BI抗体 | Abcam | ab52629 |
| LDL-R抗体 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-11824 | |
| 小鼠和兔特异性HRP/DAB(ABC)检测免疫组化试剂盒 | Abcam | ab64264 | |
| 蛋白质印迹 | RIPA裂解液 | Beyotime Institute of Biotechnology | P0013B |
| 蛋白质定量试剂盒 | Beyotime Institute of Biotechnology | P0012 | |
| PPARα抗体 | ProteinTech Group, Inc. | 15540-1-AP | |
| SR-BI抗体 | Abcam | ab52629 | |
| LDL-R抗体 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-11824 | |
| ABCG5抗体 | BIOSS | bs-5013R | |
| ABCG8抗体 | BIOSS | bs-10149R | |
| FXR抗体 | ImmunoWay Biotechnology Company | NR1H4, | |
| CYP7A1抗体 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-14426 | |
| GAPDH抗体 | Sangon Biotech Co., Ltd. | B661204-0001 | |
| HRP标记兔抗鼠IgG二抗 | Cell Signaling Technology, Inc. | 58802 | |
| 增强化学发光检测试剂 | GE Healthcare | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | 雄性SD大鼠,6-8周龄,体重180-200g;高脂饮食成分(标准饲料82%、猪油10%、胆固醇1%、胆酸盐1%、蛋黄粉5%);喂养时间5周;每组n=8 阅读提示:Methods: Animals and treatments |
| 药物干预 | 桑叶剂量(0.9、0.6、0.3 g/kg);阿托伐他汀剂量(6.0 mg/kg);给药方式(口服灌胃);给药频率(每日一次);给药时间(5周) 阅读提示:Methods: Animals and treatments |
| 血清生化检测 | 血液离心条件(206 × g,15 min,4°C);检测指标(TC、TG、HDL-C、LDL-C、AST、ALT);使用全自动生化分析仪 阅读提示:Methods: Biochemical analysis and liver TC, TG and TBA assay |
| 肝脏和粪便脂质检测 | 肝脏匀浆制备方法(0.5 g组织加4.5 ml无水乙醇);离心条件(825 × g,10 min);粪便提取方法(0.3 g粉末加3.4 ml无水乙醇,超声处理);检测指标(TC、TG、TBA) 阅读提示:Methods: Biochemical analysis and liver TC, TG and TBA assay; Fecal TC and TBA levels determination |
| 蛋白质印迹 | 蛋白提取方法(~100 mg肝组织,RIPA裂解);离心条件(18,246 × g,15 min,4°C);上样量(50 µg/lane);一抗及稀释比例(PPARα、SR-BI、LDL-R、ABCG5、ABCG8、FXR、CYP7A1、GAPDH均1:1,000);二抗稀释比例(1:1,000);内参(GAPDH) 阅读提示:Methods: Western blot analysis |