建立OVA诱导的哮喘小鼠模型
建立哮喘动物模型以评估猪牙花的抗哮喘作用。
雌性BALB/c小鼠用OVA和氢氧化铝水合物腹腔注射致敏,然后用雾化OVA攻击,并给予不同处理(对照组、水对照组、地塞米松组、猪牙花提取物低剂量和高剂量组)。
Erythronium japonicum attenuates histopathological lung abnormalities in a mouse model of ovalbumin-induced asthma.
包含OVA诱导哮喘动物模型、BALF细胞与IgE检测、组织病理学、免疫组化及HPLC成分分析等多个独立证据层级,且明确包含功能验证和机制验证。
雌性BALB/c小鼠OVA诱导哮喘模型 OVA致敏和攻击的BALB/c小鼠
雌性BALB/c小鼠(5周龄,n=80) OVA致敏剂量:20 µg OVA和1 mg氢氧化铝水合物腹腔注射,在第1天和第8天进行 5% OVA雾化攻击30分钟,在第21至25天进行 猪牙花提取物口服剂量:60和600 mg/kg/天
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立哮喘动物模型以评估猪牙花的抗哮喘作用。
雌性BALB/c小鼠用OVA和氢氧化铝水合物腹腔注射致敏,然后用雾化OVA攻击,并给予不同处理(对照组、水对照组、地塞米松组、猪牙花提取物低剂量和高剂量组)。
评估猪牙花对OVA诱导的气道炎症指标的影响。
收集支气管肺泡灌洗液,计数总白细胞和分类白细胞,并用ELISA检测IgE水平。
评估猪牙花对OVA诱导的肺组织形态学改变的影响。
肺组织经固定、包埋、切片,进行H&E和PAS染色,观察黏液分泌、嗜酸性粒细胞浸润、杯状细胞和上皮细胞增生。
定量肺组织中CD4+、CD8+、CD19+细胞及Th1/Th2相关因子的表达。
免疫组织化学染色检测CD4、CD8、CD19、T-bet、GATA-3、IFN-γ、IL-12p35、IL-12p40、TNF-α、IL-4、IL-5、IL-6和IL-13阳性细胞。
鉴定猪牙花提取物中的潜在活性化合物。
使用HPLC分析猪牙花提取物,鉴定出绿原酸和咖啡酸。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 致敏 | 卵清蛋白 | Sigma-Aldrich | -- |
| 氢氧化铝水合物 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 雾化攻击 | 雾化器 | Omron Co. Ltd. | NE-U17 |
| BALF收集与细胞计数 | Hemavet多物种血液学系统 | Drew Scientific, Inc. | -- |
| IgE检测 | 小鼠IgE ELISA试剂盒 | Abnova | -- |
| 麻醉 | Zoletin | Virbac | -- |
| 抗体 | 大鼠抗小鼠CD4单克隆抗体 | eBioscience | 14-9766 |
| 大鼠抗小鼠CD8单克隆抗体 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-18913 | |
| 兔抗小鼠CD19多克隆抗体 | Abbiotec | 250585 | |
| 兔抗小鼠Tbx21/T-bet多克隆抗体 | Bioss | bs-3599R | |
| 山羊抗小鼠GATA-3抗体 | OriGene | TA305795 | |
| 大鼠抗小鼠IFN-γ单克隆抗体 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-74104 | |
| 山羊抗小鼠IL-12p35多克隆抗体 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-9350 | |
| 大鼠抗小鼠IL-12p40单克隆抗体 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-57258 | |
| 兔抗小鼠TNF-α多克隆抗体 | BioVision | 3053R-100 | |
| 大鼠抗小鼠IL-4单克隆抗体 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-73318 | |
| 兔抗小鼠IL-5多克隆抗体 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-7887 | |
| 兔抗小鼠IL-6多克隆抗体 | Abnova | PAB16165 | |
| 山羊抗小鼠IL-13多克隆抗体 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-1776 | |
| 免疫组化检测 | 生物素化二抗 | Dako | -- |
| HPLC分析 | 高效液相色谱系统 | Agilent Technology | -- |
| Zorbax extend-C18色谱柱 | -- | -- | |
| 甲醇 | J.T. Baker | -- | |
| 咖啡酸 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 绿原酸 | Sigma-Aldrich | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | 小鼠品系、性别、年龄、数量;致敏剂量和途径;攻击浓度和时间;给药剂量和途径 阅读提示:Materials and methods: Establishment of a mouse model of OVA-induced asthma |
| BALF分析 | 灌洗液体积、离心条件、细胞计数方法、IgE检测方法 阅读提示:Materials and methods: Analysis of bronchoalveolar lavage fluid (BALF) |
| 组织病理学分析 | 组织固定、包埋、切片厚度、染色方法 阅读提示:Materials and methods: Histopathological analysis |
| 免疫组织化学分析 | 一抗浓度和孵育条件、抗原修复方法、阳性细胞计数方法 阅读提示:Materials and methods: Immunohistochemical analysis |
| HPLC分析 | 色谱柱规格、流动相、梯度、检测波长 阅读提示:Materials and methods: HPLC analysis |