建立PTPE动物模型
建立时间依赖的肝萎缩猪模型以研究门静脉栓塞后肝萎缩的组织学变化。
对五头猪在荧光引导下行分段PTPE,注射10 mL无水乙醇,分别在第0天、第2周、第4周和第6周处死,取得肝脏标本。
Liver atrophy after percutaneous transhepatic portal embolization occurs in two histological phases: Hepatocellular atrophy followed by apoptosis.
研究包含猪模型和人类标本的病理学分析,包括形态学测量、TUNEL、IHC和电镜,但样本量小,缺乏Western blot验证。
猪PTPE模型(雌性家猪) 人PTPE后肝切除标本
PTPE后观察时间点(第0天、第2周、第4周、第6周) 栓塞叶与非栓塞叶对照的样本采集 门静脉至中央静脉距离(PV-CV)和小叶面积测量 TUNEL阳性细胞比例用于凋亡评估 LC3和LAMP2免疫组化染色强度
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立时间依赖的肝萎缩猪模型以研究门静脉栓塞后肝萎缩的组织学变化。
对五头猪在荧光引导下行分段PTPE,注射10 mL无水乙醇,分别在第0天、第2周、第4周和第6周处死,取得肝脏标本。
比较栓塞叶和非栓塞叶在肝小叶水平上的形态差异。
对HE染色切片测量PV-CV距离和肝小叶横截面积,计算每个肝小叶的肝细胞数量和密度。
定量检测栓塞叶和非栓塞叶肝细胞的凋亡水平。
使用TUNEL染色,在10个随机高倍视野中计数TUNEL阳性肝细胞比例,重复五次。
评估自噬标志物LC3和LAMP2的表达变化。
通过免疫组化染色检测LC3和LAMP2表达,使用ImageJ分析强度,并以门管区神经作为阳性对照。
观察栓塞叶内代谢分区标志物GS和CYP2E1的分布变化。
通过免疫组化染色检测谷氨酰胺合成酶和CYP2E1的表达分布,评估分区范围。
确认自噬泡的形态学证据。
对福尔马林固定猪肝标本进行透射电镜观察,在80 kV下检查肝细胞细胞器。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| PTPE手术 | 21-G针 | Top | -- |
| 5-Fr鞘 | Medikit | -- | |
| 选择球囊导管 | Terumo Clinical Supply | -- | |
| 无水乙醇 | Fuso Pharmaceutical Industries | -- | |
| 凋亡检测 | 原位细胞死亡检测试剂盒,POD | Roche Diagnostic | -- |
| 免疫组化染色 | 聚合物系统 | Dako | -- |
| 免疫组化染色(LC3) | LC3抗体 | Santa Cruz Biotechnology | sc-271625 |
| 免疫组化染色(LAMP2) | LAMP2抗体 | Bioss | bs-2379R |
| 免疫组化染色(GS) | GS抗体 | Millipore | MAB302 |
| 免疫组化染色(CYP2E1) | CYP2E1抗体 | Bioss | bs-4562R |
| 图像采集 | Nanozoomer数字病理系统 | Hamamatsu Photonics | -- |
| 电子显微镜 | 日立H-7650 | Hitachi | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| PTPE动物模型 | 猪的品种、体重、PTPE具体操作(如栓塞材料、注射剂量)、观察时间点 阅读提示:Materials and Methods - Animal specimens |
| 形态学分析 | PV-CV距离测量方法、小叶面积和细胞计数标准 阅读提示:Materials and Methods - Morphological study of the lobule |
| 凋亡检测 | TUNEL试剂盒型号、检测步骤、阳性细胞计数方法 阅读提示:Materials and Methods - Evaluation of apoptotic activity |
| 免疫组化 | 抗体稀释度、抗原修复条件、染色强度量化方法 阅读提示:Materials and Methods - Immunohistochemical staining |
| 电子显微镜 | 电镜型号、固定条件、观察参数 阅读提示:Materials and Methods - Electron microscopy |