临床样本分析
评估血清IL-37水平与AP严重程度及胰腺坏死（PN）的相关性。
收集94例AP患者和39例健康对照血清，通过ELISA检测IL-37水平，并分析其与临床指标和PN的关系。
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白细胞介素-37在急性胰腺炎中保护腺泡细胞焦亡
Interleukin-37 protects against acinar cell pyroptosis in acute pancreatitis.
实验完整度
高包含临床样本分析、多种动物模型（雨蛙素、TLCS、L-精氨酸）、转基因和敲除小鼠、体外细胞实验及机制验证（Western blot、流式），多个独立证据层级。
主要模型
IL37tg转基因小鼠 雨蛙素诱导的急性胰腺炎小鼠模型 TLCS诱导的急性胰腺炎小鼠模型 L-精氨酸诱导的急性胰腺炎小鼠模型
重点核对
血清IL-37水平与AP严重程度负相关（PN发生风险） IL-37转基因或重组IL-37给药对实验性AP的保护作用 IL-37抑制GSDMD介导的腺泡细胞焦亡 胰腺特异性GSDMD敲除抵消IL-37的保护作用
摘要
急性胰腺炎（AP）是一种局部和/或全身性炎症性疾病，始于腺泡细胞损伤和坏死；它没有有效的药物治疗，因此仍然是一种危及生命的疾病。白细胞介素-37（IL-37）是一种天然免疫调节剂，已显示出抗炎作用；然而，IL-37在AP中的作用尚不清楚。测量了39名健康对照和94名AP患者的血清IL-37水平。应用胆囊收缩素诱导体外胰腺腺泡细胞损伤。体内研究包括经典的实验性AP模型，如雨蛙素、L-精氨酸和牛磺石胆酸3-硫酸二钠盐。使用携带IL-37基因的转基因小鼠模型和重组IL-37给药进一步研究IL-37在AP中的功能。使用胰腺特异性gasdermin D敲除（GSDMD敲除）小鼠探讨IL-37的保护机制。我们的结果表明，人类血清IL-37水平与AP的严重程度呈负相关。此外，IL-37转基因小鼠和补充重组IL-37均可保护免受AP。机制上，IL-37能够抑制受损腺泡细胞的焦亡，胰腺中特异性缺失GSDMD抵消了IL-37的保护作用。我们的研究表明，IL-37在AP中保护腺泡细胞焦亡。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- IL-37在急性胰腺炎（AP）中的作用及其潜在机制是什么？
- 核心机制
- IL-37通过抑制NLRP3炎性小体驱动的GSDMD介导的腺泡细胞焦亡来保护AP。
- 主要证据
- 临床数据显示血清IL-37与AP严重程度负相关；IL-37转基因和重组IL-37在多种AP模型中减轻胰腺损伤；在体外和体内抑制焦亡相关蛋白表达；胰腺特异性GSDMD敲除小鼠中IL-37保护作用消失。
- 研究意义
- IL-37作为天然免疫调节剂，可能作为AP的预后生物标志物，并为AP治疗提供新的策略。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
体内动物模型验证
验证IL-37在实验性AP中的保护作用。
使用IL37tg转基因小鼠和重组IL-37处理，在雨蛙素、TLCS和L-精氨酸诱导的AP模型中评估胰腺损伤程度、血清淀粉酶、脂肪酶和IL-1β水平。
体外细胞实验
验证IL-37对腺泡细胞损伤和焦亡的直接抑制作用。
用CCK刺激266-6细胞系和原代腺泡细胞，同时加入rIL37，检测LDH释放、PI染色和caspase-1/PI双阳性细胞比例。
机制研究
探究IL-37抑制腺泡细胞焦亡的分子机制。
通过Western blot检测焦亡相关蛋白（GSDMD、NLRP3、caspase-1）和STAT3磷酸化水平；使用GSDMD抑制剂disulfiram和胰腺特异性GSDMD敲除小鼠验证IL-37依赖GSDMD。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| ELISA | 人IL-37/IL-1F7 ELISA试剂盒 | R&D Systems | DY1975-05 |
| IL-1β ELISA试剂盒 | Thermo Fisher Scientific | 88-7013 | |
| 动物实验 | 雨蛙素 | NJPeptide | -- |
| 牛磺石胆酸3-硫酸二钠盐 | Sigma-Aldrich | -- | |
| L-精氨酸 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 细胞实验 | 胆囊收缩素 | Sigma-Aldrich | -- |
| 重组人IL-37 | R&D Systems | 1975-IL-025 | |
| 细胞培养 | DMEM培养基 | Gibco | -- |
| 胎牛血清 | Gibco | -- | |
| 青霉素-链霉素 | Gibco | -- | |
| 细胞分离 | 胶原酶I | Sigma-Aldrich | -- |
| 胶原酶IV | Sigma-Aldrich | -- | |
| HEPES缓冲液 | Sigma-Aldrich | -- | |
| LDH检测 | LDH细胞毒性检测试剂盒 | Beyotime Biotechnology | -- |
| 焦亡检测 | 焦亡/Caspase-1检测试剂盒（绿色） | ImmunoChemistry | 9145 |
| 流式染色 | 碘化丙啶 | BD Biosciences | -- |
| PE/Cy7-CD4抗体 | BioLegend | clone | |
| PerCP/Cy5.5-CD11b抗体 | BioLegend | clone | |
| APC/Cy7-CD11c抗体 | BioLegend | clone | |
| BV421-F4/80抗体 | BioLegend | clone | |
| AF488-CD206抗体 | BioLegend | clone | |
| APC-TNF-α抗体 | Thermo Fisher Scientific | 17-7321-81 | |
| Western blot | RIPA裂解液 | -- | -- |
| BCA蛋白定量试剂盒 | Pierce, Thermo Fisher Scientific | -- | |
| GAPDH抗体 | Sigma-Aldrich | -- | |
| NLRP3抗体 | Cell Signaling Technology | D4D8T | |
| GSDMD抗体 | Abcam | ab219800 | |
| Caspase-1抗体 | AdipoGen | AG-20B-0042 | |
| STAT3抗体 | Abclonal | A19566 | |
| 磷酸化STAT3抗体 | Abclonal | AP0705 | |
| Beclin 1抗体 | Abclonal | A21191 | |
| LC3B抗体 | Abcam | ab48394 | |
| Bax抗体 | Sabbiotech | 29057 | |
| Bcl-2抗体 | Abcam | ab196495 | |
| 免疫组化 | MPO抗体 | Abcam | ab9535 |
| CD68抗体 | Wuhan Servicebio Technology | GB11067 | |
| cleaved GSDMD抗体 | Santa Cruz Biotechnology | sc-393581 | |
| NLRP3抗体 | Abcam | ab214185 | |
| IL-37抗体 | Proteintech | 60296-1-Ig | |
| RT-qPCR | TRIzol试剂 | -- | -- |
| 动物实验 | 双硫仑 | -- | -- |
| 成像设备 | Motic Images Plus 2.0系统 | Motic China Group Co. | -- |
| 图像分析 | ImageJ软件 | NIH | -- |
| 流式分析 | CytExpert for DxFLEX软件 | Beckman Inc. | -- |
| FlowJo 10.0 | Stanford University | -- | |
| 统计分析 | IBM SPSS 26.0 | IBM | -- |
| GraphPad Prism 9.0 | GraphPad | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 临床样本分析 | 血清IL-37水平与AP严重程度、PN发生的关系 阅读提示：Methods: Participants and human-derived sample collection; Results: Figure 1 |
| 动物模型建立 | 雨蛙素剂量200 μg/kg，10次，1小时间隔；TLCS 2 mg/kg逆行注射；L-精氨酸3.3 g/kg，3次 阅读提示：Methods: Animal models and treatments; Figure 2-3 legends |
| IL-37干预 | 重组IL-37剂量、给药时间（1小时后） 阅读提示：Methods: Animal models and treatments; Figure 4 legends |
| 体外细胞实验 | CCK浓度5-10 μM，刺激时间12小时（266-6）或6小时（PACs）；rIL37浓度10-250 ng/mL 阅读提示：Methods: Cell lines, culture, and CCK treatment; Figure 4C-4E |
| 焦亡检测 | Caspase-1/PI双阳性细胞比例；GSDMD、NLRP3、caspase-1蛋白表达 阅读提示：Methods: Flow cytometry analysis; Results: Figure 5 |