Alamandine/MrgD轴通过调节有氧糖酵解和线粒体自噬阻止TGF-β1介导的成纤维细胞活化

背景：特发性肺纤维化是一种慢性进行性、致死性疾病，其中异位肺成纤维细胞活化起着重要作用。我们之前已表明alamandine通过MAS相关G蛋白偶联受体D发挥抗纤维化作用。在此，我们进一步研究它如何通过调节葡萄糖代谢和线粒体自噬来调节转化生长因子β1诱导的LF活化。方法：在体外，我们检测了TGF-β1处理的细胞中糖酵解相关蛋白己糖激酶2、6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3和乳酸。使用Seahorse实验检测耗氧率和细胞外酸化率。然后，使用透射电子显微镜、mt-Keima以及Parkin和COX IV与LC3和LAMP1的共定位评估线粒体自噬。通过3MA和巴弗洛霉素A1检测HK2和PFKFB3的自噬降解，并通过它们与LC3和LAMP1的共定位进行评估。检测ALA对LF活化标志物胶原蛋白I和α-SMA的影响。还在体内研究了ALA对葡萄糖代谢、线粒体自噬和LF活化的影响。结果：我们发现ALA/MrgD轴通过下调HK2和PFKFB3表达抑制糖酵解，从而改善TGF-β1介导的LF活化。乳酸通过维持HK2和PFKFB3的表达，维持糖酵解和LF活化之间的正反馈。我们还表明，糖酵解增强是由于阻断HK2和PFKFB3的自噬降解，而TGF-β1上调其mRNA水平，而所有这些在添加ALA后均得到改善。重要的是，我们确定TGF-β1调节Parkin/LC3介导的线粒体自噬也促进糖酵解，但ALA可逆转这一作用。此外，我们证明ALA在体内抵消了博来霉素对HK2、PFKFB3、LC3、Parkin和LF活化的影响。结论：在本研究中，我们表明ALA/MrgD轴通过调节有氧糖酵解和线粒体自噬来阻止TGF-β1介导的成纤维细胞活化。