用于转录组分析的支持细胞高效分离的两种互补方法

支持细胞（SCs）是睾丸生精小管中唯一存在的体细胞。它们直接与生殖细胞相互作用并支持其发育，因此在精子发生过程中具有不可或缺的作用。SCs首先以增殖状态出现，然后随着第一波精子发生的启动，进展为成熟的“滋养”状态，支持终身连续的精子产生。在此发育过程中，SC转录组必须快速适应，因为SC成熟的障碍常常导致男性生育能力缺陷。由于其精子发生中的重要性，一种可靠、快速且精确的分离高纯度、有活力且未受污染的支持细胞的方法在很大程度上仍然缺失。我们开发了一种改进的睾丸单细胞悬液制备方法，包括两种替代方案，通过FACS将SCs与睾丸其余细胞分离。第一种分选方案基于它们共表达表面特异性标记FSHr和Occludin-1，第二种方案则侧重于SCs与FSHr特异性抗体和Hoechst 33342的共染色，以区分睾丸细胞的DNA含量。整个程序可在不到3小时内完成，从而允许分析这些细胞的发育相关转录谱。值得注意的是，我们的比较研究表明，该方法产生的SC转录组与通过细胞特异性荧光蛋白表达快速分离的SCs大体相当。有趣的是，我们还显示，分选为FSHr+Occludin+的SCs含有来自所有类型睾丸生殖细胞的可观转录本部分。根据其2C DNA含量分选SCs显著减少了这些转录本的存在，因此似乎是准确测定SC转录组的最合适方法。我们相信，这些分离SCs的新方法将有助于研究人员阐明其功能及其在精子发生和男性不育相关疾病中的作用。