用于蛋白质、RNA和质粒工程的无缝高效定点诱变

定点诱变对于蛋白质、RNA和质粒工程不可或缺。理想情况下，此类诱变的效率应接近100%，但许多现有方法无法达到这一目标，因此需要大量的筛选工作。我们最近优化了一种基于带有3'突出端的引物对的PCR的创新型位点特异性诱变方法，从而达到了约100%的理想效率。这种高效率以及带有3'突出端的引物对的“握手”特性使我们将该方法适用于无缝盒式诱变，从而实现了DNA片段的高效缺失（高达5 kb）、插入（高达0.4 kb）或替换。从概念上讲，缺失和插入是替换突变的特殊情况，其中分别要插入和删除的序列长度为0 bp。这是因为替换诱变将片段A转换为片段B；对于缺失，片段B的大小为0 bp，而对于插入，片段A的大小为0 bp。因此，这种新方法使定点诱变和盒式诱变成为不同类型生物医学研究中蛋白质、RNA和质粒工程的高效可靠工具。© 2026作者。Current Protocols由Wiley Periodicals LLC出版。