ANKRD49通过PKNOX1/TGF-β1/SMAD轴促进非小细胞肺癌的上皮-间质转化

背景：锚蛋白重复结构域49（ANKRD49）在非小细胞肺癌（NSCLC）中高表达，并通过激活p38/ATF-2/MMP或JNK/ATF-2/c-Jun/MMP通路促进肿瘤细胞侵袭和转移。尽管上皮-间质转化（EMT）对肿瘤播散至关重要，但ANKRD49在EMT中的作用仍不清楚。本研究旨在探讨ANKRD49对NSCLC EMT的影响，并阐明其潜在分子机制。方法：使用组织微阵列（TMAs）结合免疫组织化学（IHC）分析肺腺癌（LUAD）组织中ANKRD49和EMT标志物的表达水平。通过实时qPCR、Western blot和IHC在体内外评估ANKRD49在EMT中的作用。通过实时qPCR、Western blot、酶联免疫吸附试验（ELISA）和IHC定量关键信号分子。使用荧光素酶报告基因实验和染色质免疫沉淀（ChIP）验证PKNOX1对TGF-β1的转录调控。通过免疫共沉淀（Co-IP）和免疫荧光显微镜检查ANKRD49与PKNOX1之间的蛋白质-蛋白质相互作用。结果：TMA分析显示ANKRD49与E-钙粘蛋白表达显著负相关，而与α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和TGF-β1正相关。ANKRD49过表达促进EMT，而其敲低在细胞和动物模型中抑制EMT。此外，ANKRD49上调增加TGF-β1水平，TGF-β1受PKNOX1转录调控，而ANKRD49沉默则具有相反效果。机制上，ANKRD49与PKNOX1物理相互作用，PKNOX1结合TGF-β1启动子，升高TGF-β1表达并随后激活SMAD信号。一致地，在LUAD组织中ANKRD49和PKNOX1水平正相关。结论：ANKRD49通过与PKNOX1相互作用激活TGF-β1/SMAD通路促进NSCLC的EMT。PKNOX1通过转录调控TGF-β1介导这一过程。