IGF2融合单克隆抗体的泛丝状病毒活性：IGF1R交叉结合损害其活性，Y27L突变可恢复活性

背景：丝状病毒（埃博拉和马尔堡）引起严重的高死亡率传染病。中和抗体是有前景的抗病毒候选药物，但针对多种丝状病毒的广谱反应性抗体很少见。抗体-配体融合策略将保守糖蛋白靶向抗体与IGF2R配体结合，可介导内体抗体递送。此前，我们展示了NPC2融合的AF-03（一种靶向GP1核心区的抗体）表现出泛丝状病毒中和活性。然而，该NPC2融合体面临质量控制挑战，其应用受到异质性糖基化、批次不一致和CMC可行性差的限制。方法：将人IGF2或其Y27L变体通过肽接头融合到AF-03轻链的N端。通过流式细胞术和ELISA检测细胞附着。通过流式细胞术、蛋白质印迹和共聚焦成像评估内化。使用荧光素酶报告系统在体外测定对假型丝状病毒的中和活性。结果：IGF2融合抗体（称为AF03-IL）在体外对多种假型丝状病毒表现出广谱中和活性。然而，其效力，包括内化和中和活性，远弱于NPC2融合抗体（称为AF03-NL）。活性降低是由IGF2与细胞表面IGF1R结合引起的。为了克服这一限制，我们在IGF2结构域引入了一个单点突变（Y27L）。这种新构建体命名为AF03-ILm1，与亲本AF03-IL相比，表现出优越的内化和中和活性。结论：IGF2融合的AF-03的抗丝状病毒活性因与IGF1R的交叉结合而受损，而Y27L的引入可恢复该活性。这项工作也可能为基于IGF2的蛋白质降解分子的设计提供启示。