一种基于微球的筛选平台，用于鉴定破坏PD-1/PD-L1相互作用的单克隆抗体

靶向免疫检查点通路（如程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）/PD-L1）的单克隆抗体（mAb）是现代免疫治疗的核心，但评估其功能性阻断的可扩展方法仍然有限。我们提出了一种基于微球的流式细胞术检测方法，用于定量抗体对PD-1/PD-L1相互作用的抑制。将重组人PD-1蛋白偶联到聚苯乙烯微球上，并测量其与荧光标记的重组人PD-L1蛋白的相互作用。抗PD-L1单抗的抑制活性通过其破坏这种相互作用的能力进行定量。该检测方法在批内和批间精密度上得到验证，此外，通过T细胞共培养实验确认了其功能性。该检测方法显示出αPD-L1单抗的剂量依赖性抑制，计算的平均IC50为3.122 µg/mL。该方法在测定抗体阻断活性方面具有可重复性，三次独立运行之间的相对标准偏差（RSD）<20%。在接近微球检测中检测到的IC50浓度下，该抗体显著恢复了共培养体外系统中T细胞表面的CD69表达（p = 0.0001）。此外，该方法能够成功区分两种不同亲和力的抗PD-L1抗体的阻断能力。这种兼容高通量的平台为筛选PD-1/PD-L1阻断抗体提供了可靠工具，支持免疫治疗药物的发现和开发。