使用DSP介导的交联在HEK293T培养细胞中检测RHIM蛋白寡聚复合物形成的方案

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研究问题

如何在细胞水平检测RHIM蛋白（如ZBP1、RIPK3和病毒Nsp13）的寡聚化？

核心机制

RHIM-RHIM相互作用介导RHIM蛋白组装成高阶寡聚体，DSP交联可稳定这些复合物。

主要证据

在HEK293T细胞中共表达ZBP1和RIPK3可增强ZBP1的NP40不溶性寡聚体；共表达Nsp13与ZBP1或RIPK3可增强其高阶寡聚体形成；Nsp13-Tet突变体（VQIG→AAAA）降低ZBP1寡聚体形成，表明RHIM依赖性。

研究意义

该方案可用于研究RHIM蛋白寡聚化在细胞死亡和炎症中的调节作用，以及宿主与病毒RHIM蛋白之间的相互作用。