弓形虫感染神经元改变细胞外囊泡的产生和内容，引导星形胶质细胞表型并导致感染脑中GLT-1的缺失

弓形虫（T. gondii）是一种多产的原始寄生虫，在中枢神经系统的神经元内形成包囊，维持宿主终身的感染。星形胶质细胞通过提供营养和结构支持对神经元健康至关重要，并通过与神经元的持续通讯帮助调节神经递质。目前尚不清楚感染和细胞内包囊的存在如何破坏这些细胞之间的关键关系。细胞外囊泡（EVs）在细胞间通讯中发挥作用，可包含蛋白质、脂质、DNA、miRNA和其他RNA亚型。所有细胞都产生EVs，它们在神经元-星形胶质细胞相互作用中发挥重要作用，包括调节星形胶质细胞上的谷氨酸受体。先前的工作表明，弓形虫感染降低了星形胶质细胞主要谷氨酸转运体GLT-1的表达。在这里，我们测试了神经元的包囊感染是否改变了EVs的产生和内容。从未感染和感染的原代小鼠皮层神经元中分离出EVs，并通过纳米粒子追踪分析（NTA）、透射电子显微镜（TEM）、ELISA、western blot、液相色谱（LC）-质谱（MS）/MS和microRNA测序确认了它们的大小、浓度和特征。分析显示，神经元感染减少了神经元的EV产生，并改变了其蛋白质和miRNA内容。除了宿主蛋白内容的变化外，感染神经元的EVs还含有弓形虫蛋白GRA1、GRA2、GRA7、MAG1和MAG2。将神经元的EVs与原代星形胶质细胞孵育后，可以在细胞内EVs和含有GRA7+EV的细胞核中观察到GRA7蛋白。来自感染神经元的EVs改变了星形胶质细胞的基因表达，导致促炎转录特征增加，以及GLT-1蛋白表达下调，体内星形胶质细胞也发现了类似的转录变化。这些结果表明，大脑中的寄生虫感染能够改变EV的产生以及神经元和星形胶质细胞之间的基本通讯。