低剂量流感病毒感染及抗体反应评估
验证IFITM3 KO小鼠能否对低剂量流感病毒感染产生功能性抗体反应。
IFITM3 KO小鼠经鼻内感染200 TCID50的WSN(H1N1)病毒,第18天收集血清检测HAI和中和抗体,第30天用致死剂量WSN或X31(H3N2)进行攻毒,监测体重和生存率。
IFITM3-deficient mice as a model for testing influenza virus vaccines via the intramuscular route.
研究包含体内感染模型、疫苗接种模型、抗体检测和攻毒保护实验等多个独立实验层级,并进行了功能验证和机制探讨。
IFITM3基因敲除小鼠(C57BL/6N背景) 野生型C57BL/6N小鼠 MDCK细胞
感染剂量:200 TCID50 WSN(低剂量)及2,000 TCID50 WSN(致死剂量) 疫苗接种:2 μg HA蛋白(A/Victoria/361/2011 H3N2)与AddaVax佐剂1:1混合,肌肉注射50 μL 攻毒时间:初次感染后第30天进行同源或异亚型攻毒 病毒滴度检测:攻毒后第5天检测肺组织病毒滴度 抗体检测:血清经1:1000稀释后ELISA检测IgG亚型,微中和实验起始稀释度1:10
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
验证IFITM3 KO小鼠能否对低剂量流感病毒感染产生功能性抗体反应。
IFITM3 KO小鼠经鼻内感染200 TCID50的WSN(H1N1)病毒,第18天收集血清检测HAI和中和抗体,第30天用致死剂量WSN或X31(H3N2)进行攻毒,监测体重和生存率。
评估IFITM3 KO小鼠对多种非适应人源和动物源流感病毒的复制支持能力。
感染WT和IFITM3 KO小鼠多种人源(H3N2、B系)、禽源(H10N8、H5N1、H7N9)和猪源(D/swine)流感病毒,感染后第5天检测肺病毒滴度。
评估IFITM3 KO小鼠对肌肉注射HA蛋白疫苗的抗体反应。
WT和IFITM3 KO小鼠经肌肉注射2 μg HA蛋白(A/Victoria/361/2011)与AddaVax佐剂混合疫苗,进行初次和加强免疫,ELISA检测血清IgG亚型。
评估IFITM3 KO小鼠疫苗诱导的抗体功能及攻毒保护效果。
加强免疫后的小鼠用同源H3N2病毒或异源H10N8病毒攻毒,检测血清中和抗体滴度和攻毒后第5天的肺病毒滴度。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物模型 | IFITM3基因敲除小鼠 | -- | -- |
| 疫苗接种 | 流感病毒A/Victoria/361/2011 (H3N2) HA蛋白 | Sino Biological | Cat 40145-V08H1 |
| AddaVax佐剂 | InvivoGen | Cat vac-adx-10 | |
| 病毒感染 | A/WSN/1933 (H1N1)病毒 | -- | -- |
| X31重配病毒 | -- | -- | |
| A/Victoria/361/2011 (H3N2)病毒 | BEI Resources | Cat NR-44022 | |
| B/Brisbane/33/2008病毒 | BEI Resources | Cat NR-42006 | |
| D/swine/OH/18TOSU0287/2018病毒 | -- | -- | |
| A/northern shoveler/Mississippi/11OS145/2011 (H7N9)病毒 | -- | -- | |
| A/American Green-Winged Teal/Ohio/17OS1834/2017 (H10N8)病毒 | -- | -- | |
| A/Black Duck/Tennessee/17OS036/2017 (H5N1)病毒 | -- | -- | |
| 病毒培养 | 10日龄鸡胚 | AVSbio | Cat 10100331 |
| 病毒滴度测定 | MDCK细胞 | BEI Resources | Cat NR-2628 |
| 细胞培养 | Dulbecco改良Eagle培养基 | -- | -- |
| 胎牛血清 | Atlas Biologicals EquaFetal serum | -- | |
| 青霉素-链霉素 | -- | -- | |
| 病毒滴度测定 | 牛血清白蛋白 | -- | -- |
| TPCK处理的胰蛋白酶 | Worthington Biochemical Corporation | -- | |
| IAV核蛋白一抗 | BEI Resources | Cat NR-19868 | |
| AlexaFluor 488偶联二抗 | ThermoFisher Scientific | Cat A11029 | |
| 组织处理 | Precellys Evolution Touch匀浆器 | -- | -- |
| 抗体检测 | 针对IgG亚型的生物素标记二抗 | Southern Biotech | Total IgG (Cat 1030-08), IgG1 (Cat 1070-08), IgG2B (Cat 1090-08), IgG2C (Cat 1079-08), IgG3 (Cat 1100-08) |
| 链霉亲和素-辣根过氧化物酶 | R&D | Cat 893975 | |
| 显色试剂A和B | R&D | Cat DY999 | |
| 终止液 | R&D | Cat DY994 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 病毒感染 | 感染剂量:低剂量感染使用200 TCID50 WSN,致死攻毒使用2,000 TCID50 WSN或10,000 TCID50 X31 阅读提示:Methods: Viruses and Infections; Figure 1 legend |
| 疫苗接种 | 疫苗剂量:2 μg HA蛋白,佐剂:AddaVax(1:1混合),注射体积:50 μL,途径:肌肉注射 阅读提示:Methods: Mice and Vaccinations; Figure 3 legend |
| 抗体检测 | 血清稀释度:ELISA使用1:1000稀释,HAI和微中和起始稀释度1:10,2倍系列稀释 阅读提示:Methods: Antibody Measurements |
| 攻毒实验 | 攻毒剂量:10,000 TCID50,攻毒后第5天检测肺病毒滴度 阅读提示:Results; Figure 4 legend |
| 病毒滴度测定 | TCID50测定使用MDCK细胞,病毒稀释液含2% BSA和TPCK-胰蛋白酶,孵育3天,使用IFNα抗体和AlexaFluor 488二抗染色,采用Reed-Muench方法计算滴度 阅读提示:Methods: Viral titers |