Ferritin nanoparticle-based Nipah virus glycoprotein vaccines elicit potent protective immune responses in mice and hamsters.
文献包含体外蛋白表达与纳米颗粒组装表征、小鼠免疫原性分析（抗体及T细胞反应）、仓鼠免疫与攻毒保护实验等多个独立证据层级，并明确进行了功能验证和体内保护效力评估。
BALB/c小鼠 叙利亚金仓鼠 293F细胞 Vero E6细胞
疫苗剂量：5 μg/只（sG-ST或Ghead-ST，或含等量sG-ST或Ghead-ST的FeNP-sG或FeNP-Ghead） 免疫方案：初次免疫后28天加强免疫（小鼠），仓鼠为0天和21天免疫 NiV攻毒剂量：仓鼠以1000 LD50的NiV马来西亚株腹腔注射 中和抗体检测：伪病毒中和试验（VSVΔG-GFP/NiVG+F）和活病毒PRNT（NiV孟加拉株、马来西亚株和HeV，600 PFU/mL） 样本量：小鼠每组6只，仓鼠每组数量文中未明确说明
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
制备并验证基于铁蛋白纳米颗粒展示NiV sG或Ghead的候选疫苗。
将NiV孟加拉株的sG（残基71-602）和Ghead（残基182-602）基因克隆至pCAGGS载体，转染293F细胞表达并纯化；将幽门螺杆菌铁蛋白与SpyCatcher融合，在大肠杆菌BL21中表达并复性形成FeNP；通过SpyCatcher/SpyTag技术以1:4摩尔比偶联sG-ST或Ghead-ST，并经尺寸排阻色谱纯化；通过SDS-PAGE、SEC和负染电镜表征纳米颗粒形成，并用ELISA检测与中和抗体m102.4和HENV的结合活性。
评估候选疫苗在小鼠中诱导体液和细胞免疫反应的能力。
BALB/c小鼠（每组6只）在第0天和第28天肌肉注射5 μg sG-ST、Ghead-ST、FeNP-sG或FeNP-Ghead（含等量抗原）混以AddaVax佐剂，对照组注射PBS。在第14、28、42天采血检测sG特异性IgG（ELISA）和针对NiV/HeV假病毒的中和抗体（VSVΔG-GFP/NiVG+F或HeVG+F）；在第42天（加强后14天）处死小鼠，取脾细胞分析CD4+和CD8+ T细胞中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4的表达（流式）及IFN-γ和IL-4分泌细胞（ELISpot）。
在仓鼠模型中评估候选疫苗的免疫原性和保护效力。
雌性叙利亚金仓鼠（4-6周龄）在第0天和第21天肌肉注射5 μg sG-ST或含等量sG-ST的FeNP-sG（混以AddaVax佐剂），对照组注射PBS。在第21、35、49天采血检测sG特异性IgG和中和抗体（伪病毒和活病毒PRNT，针对NiV孟加拉株、马来西亚株和HeV）。在第52天（第49天转至BSL-4实验室适应3天后）用1000 LD50的NiV马来西亚株腹腔攻击，监测体重14天并观察至28天。
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | DMEM培养基 | Gibco | -- |
| 胎牛血清 | Gibco或BI | -- | |
| 青霉素-链霉素 | -- | -- | |
| SMM 293-TII表达培养基 | Sino Biological | -- | |
| 蛋白表达与纯化 | PEI MAX转染级线性聚乙烯亚胺盐酸盐（分子量40,000） | Polysciences | -- |
| 丙戊酸 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 蛋白纯化 | Ni-Excel琼脂糖 | GE Healthcare Life Sciences | -- |
| HisTrap 4FF柱 | GE Healthcare | -- | |
| Superose 6尺寸排阻柱 | -- | -- | |
| 动物免疫 | AddaVax佐剂 | InvivoGen | -- |
| ELISA | 辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠IgG（H+L） | ABclonal | -- |
| 辣根过氧化物酶标记的山羊抗仓鼠IgG（H+L） | ABclonal | -- | |
| 终止液 | Solarbio | -- | |
| 流式细胞术 | BD Horizon™可固定活力染料780 | BD | -- |
| 抗CD3e抗体（145-2C11） | BD | -- | |
| 抗CD4抗体（GK1.5） | BD | -- | |
| 抗CD8a抗体（53-6.7） | BD | -- | |
| 抗IL-4抗体（11B11） | BD | -- | |
| 抗TNF-α抗体（MP6-XT22） | BD | -- | |
| 抗IL-2抗体（JES6-5H4） | BD | -- | |
| 抗IFN-γ抗体（XMG1.2） | BD | -- | |
| ELISpot | 小鼠IFN-γ ELISpot板 | Dakewe Biotech | -- |
| 小鼠IL-4 ELISpot板 | Dakewe Biotech | -- | |
| 佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯 | -- | -- | |
| 假病毒中和试验 | Lipofectamine 2000转染试剂 | Invitrogen | -- |
| 仪器设备 | BD LSR Fortessa流式细胞仪 | BD | -- |
| CTL ImmunoSpot分析仪 | Cellular Technology | -- | |
| Operetta高内涵成像系统 | PerkinElmer | -- | |
| SpectraMax iD5酶标仪 | Molecular Devices | -- | |
| 假病毒中和试验 | VSVΔG-GFP病毒 | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 疫苗构建与纯化 | sG和Ghead的序列、表达系统（293F细胞）、SC-FeNP制备（大肠杆菌表达、复性）、偶联摩尔比（4:1）、纯化方法 阅读提示：见Methods 2.2、Results 3.1及补充图S1 |
| 小鼠免疫 | 小鼠品系、性别、年龄、每组数量、免疫剂量、免疫途径、佐剂（AddaVax）、免疫时间点 阅读提示：见Methods 2.3、Results 3.2和3.3、Fig. 2A和Fig. 3 |
| 仓鼠免疫与攻毒 | 仓鼠品系、性别、年龄、每组数量、免疫剂量、免疫时间点、攻毒毒株和剂量、攻毒途径 阅读提示：见Methods 2.3、Results 3.5、Fig. 4A和Fig. 5 |
| 体液免疫检测 | ELISA中sG-ST包被浓度、血清稀释倍数；中和试验中病毒/伪病毒类型、PFU或感染单位、孵育时间 阅读提示：见Methods 2.4、2.7、2.8、Results 3.2和3.4 |
| 细胞免疫检测 | 脾细胞数量、肽库刺激浓度、流式染色抗体克隆号、ELISpot板类型 阅读提示：见Methods 2.5、2.6和补充图S2 |
