通过短暂的光动力作用激活NAD(P)H氧化酶

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸[NAD(P)H]氧化酶（NOX）是细胞内活性氧的主要来源，调节重要的生理功能，其失调导致多种重大疾病。人们已致力于开发多种类型的NOX抑制剂，但用于空间和时间可控的NOX激活的生物技术尚不易获得。我们之前发现紫外线A（UVA）照射可激活啮齿动物肥大细胞中的NOX2，引发持续性钙尖峰。NOX2由多个亚基组成，使其激活研究相当复杂。在此，我们表明单亚基的非啮齿动物表达的NOX5，当在CHO-K1细胞中异位表达时，可被UVA照射（380 nm，0.1–12 mW/cm2，1.5分钟）激活，诱导重复性钙尖峰，通过Fura-2荧光钙成像监测。UVA引起的钙振荡被NOX抑制剂二苯基碘鎓氯化物（DPI）抑制，并被单线态氧（1O2）淬灭剂Trolox-C（300 μM）阻断。在NOX5-CHO-K1细胞中，用光敏剂磺化铝酞菁（SALPC 2 μM，675 nm，85 mW/cm2）进行短暂光动力作用（1.5分钟），或在miniSOG-NOX5-CHO-K1细胞中用基因编码的蛋白质光敏剂miniSOG与NOX5 N端融合（450 nm，85 mW/cm2）进行光动力作用，均可诱导持续性钙振荡，且被DPI阻断。在存在Trolox-C的情况下，miniSOG光动力作用不再在miniSOG-NOX5-CHO-K1细胞中诱导任何钙增加。人甲状腺滤泡细胞SW579和DUOX2-CHO-K1细胞中的DUOX2同样被UVA照射和SALPC光动力作用激活。这些数据共同表明，短暂的光动力作用可激活NOX。