多发性硬化症患者针对牛奶及乳抗原的IgG抗体流行情况

The prevalence of IgG antibodies against milk and milk antigens in patients with multiple sclerosis.

作者信息Rittika Chunder, Thorsten Heider, Stefanie Kuerten
PMID37492579
发布时间2023-07-10
DOI10.3389/fimmu.2023.1202006

实验完整度

包含ELISA检测多来源牛奶IgG、纯化蛋白抗原IgG及多种抗原间相关性分析,但缺少功能或机制验证实验。

主要模型

MS患者血浆样本 健康供者血浆样本

重点核对

MS患者组与健康对照组分别纳入35例和20例 血浆样本均稀释至1:200用于ELISA检测 牛乳包被浓度为30.88–35.71μg/mL,纯化蛋白为10μg/mL,重组蛋白为1μg/mL 所有抗原均设置三个复孔 统计分析使用Mann-Whitney检验与Spearman相关性分析

摘要

多发性硬化症(MS)是一种中枢神经系统(CNS)的慢性脱髓鞘疾病。MS的病理生理复杂,据说受包括饮食在内的多种环境因素影响。我们和其他人先前已经证明,饮用牛奶会加重MS患者的疾病严重程度,这可以通过乳抗原与CNS内表达的抗原之间的分子模拟来解释。在这项研究中,我们着手确定饮用牛奶的替代品,这些替代品可能对具有针对牛乳抗原的抗体滴度并与CNS抗原发生交叉反应的遗传易感性的MS患者造成较小损害。为此,我们筛选了35名MS患者和20名健康对照者,检测其对一系列动物源性牛奶、植物性替代品以及牛乳中个别抗原的IgG反应性。我们证明,与健康供者相比,MS患者对动物源性牛奶尤其是牛奶的IgG反应显著更高。我们还表明,MS患者对牛奶的反应性可归因于针对不同牛乳抗原的反应性。最后,我们的相关性数据表明,针对个别牛乳抗原的抗体与其相应的交叉反应性CNS抗原共存。总之,我们建议筛查MS患者血液中针对不同类型牛奶和乳抗原的抗体,以制定个性化饮食方案。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
MS患者与健康对照者相比,针对不同动物源性和植物性牛奶以及牛奶中个别抗原的IgG抗体反应是否存在差异,以及这些抗体是否与CNS抗原存在交叉反应。
核心机制
MS患者中针对牛乳蛋白(尤其是β-酪蛋白)的IgG反应升高,且可能与CNS抗原(如MAG、脑裂解物)存在交叉反应,支持分子模拟机制。
主要证据
ELISA检测显示MS患者对牛奶和羊奶的IgG显著高于健康对照,β-酪蛋白IgG升高最显著;同时MS患者中针对β-乳球蛋白与脑裂解物的IgG呈强相关(r=0.77),BTN1A1与MOG高度相关(r=0.98)。
研究意义
作者建议对MS患者进行血液抗体检测,以确定针对不同牛奶和乳抗原的个体化饮食方案,可能有助于个性化医疗。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

筛选不同来源牛奶的IgG反应

比较MS患者和健康对照者对动物源性及植物性牛奶的IgG反应差异

通过ELISA检测所有血浆样本对9种牛奶(动物源性4种,植物性5种)的IgG抗体滴度

2

分析个别牛乳抗原的IgG反应

确定MS患者中对牛乳的IgG反应是否由特定抗原引起

检测所有血浆样本对α-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白的IgG滴度

3

相关性分析乳抗原与CNS抗原

探索MS患者中对牛乳抗原的IgG反应是否与CNS抗原存在交叉反应

计算MS患者中对牛乳抗原的IgG滴度与人脑裂解物、MAG、MOG和BTN1A1的IgG滴度的Spearman相关性

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
Leucosep™离心管Greiner Bio-One227290
Ficoll-Paque® PLUS分离液Cytiva17-1440-03
Pierce™ BCA蛋白测定试剂盒ThermoFisher23225
高结合力96孔平底微孔板Greiner Bio-One655061
生物素化山羊抗人IgG抗体InvitrogenA18821
链霉亲和素-碱性磷酸酶ThermoFisher21324
酶标仪Tecan--
α-乳白蛋白Sigma-AldrichL5385
β-乳球蛋白Sigma-AldrichL3908
α-酪蛋白Sigma-AldrichC6780
β-酪蛋白Sigma-AldrichC6905
κ-酪蛋白Sigma-AldrichC0406
全脑裂解物Novus BiologicalsNB820-59177
重组MOGR&D Systems8535-MO-050
重组MAGSino Biological13186-H08H
重组BTN1A1Acro BiosystemsBT1-H5222
GraphPad Prism 8.0GraphPad Software, Inc.--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
样本收集与处理
血浆样本采集量、抗凝剂种类、稀释比例、PBMC分离方法、保存温度
阅读提示:Methods 2.1 Human plasma samples
抗原包被
不同牛奶的稀释系列、包被浓度、纯化蛋白与重组蛋白的包被浓度、包被体积和孵育条件
阅读提示:Methods 2.2 Antigens and their composition, 2.3 Serial dilution and bicinchoninic acid assay, Table 3
ELISA操作
血浆稀释度、封闭缓冲液成分与封闭时间、抗体浓度、孵育条件和洗涤次数
阅读提示:Methods 2.4 Enzyme-linked immunosorbent assay
数据分析
正态性检验、非参数检验选择、相关性分析类型、显著性水平
阅读提示:Methods 2.5 Statistics