筛选不同来源牛奶的IgG反应
比较MS患者和健康对照者对动物源性及植物性牛奶的IgG反应差异
通过ELISA检测所有血浆样本对9种牛奶(动物源性4种,植物性5种)的IgG抗体滴度
The prevalence of IgG antibodies against milk and milk antigens in patients with multiple sclerosis.
包含ELISA检测多来源牛奶IgG、纯化蛋白抗原IgG及多种抗原间相关性分析,但缺少功能或机制验证实验。
MS患者血浆样本 健康供者血浆样本
MS患者组与健康对照组分别纳入35例和20例 血浆样本均稀释至1:200用于ELISA检测 牛乳包被浓度为30.88–35.71μg/mL,纯化蛋白为10μg/mL,重组蛋白为1μg/mL 所有抗原均设置三个复孔 统计分析使用Mann-Whitney检验与Spearman相关性分析
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
比较MS患者和健康对照者对动物源性及植物性牛奶的IgG反应差异
通过ELISA检测所有血浆样本对9种牛奶(动物源性4种,植物性5种)的IgG抗体滴度
确定MS患者中对牛乳的IgG反应是否由特定抗原引起
检测所有血浆样本对α-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白的IgG滴度
探索MS患者中对牛乳抗原的IgG反应是否与CNS抗原存在交叉反应
计算MS患者中对牛乳抗原的IgG滴度与人脑裂解物、MAG、MOG和BTN1A1的IgG滴度的Spearman相关性
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 血浆分离 | Leucosep™离心管 | Greiner Bio-One | 227290 |
| Ficoll-Paque® PLUS分离液 | Cytiva | 17-1440-03 | |
| 蛋白浓度测定 | Pierce™ BCA蛋白测定试剂盒 | ThermoFisher | 23225 |
| ELISA | 高结合力96孔平底微孔板 | Greiner Bio-One | 655061 |
| 生物素化山羊抗人IgG抗体 | Invitrogen | A18821 | |
| 链霉亲和素-碱性磷酸酶 | ThermoFisher | 21324 | |
| 酶标仪 | Tecan | -- | |
| 抗原制备 | α-乳白蛋白 | Sigma-Aldrich | L5385 |
| β-乳球蛋白 | Sigma-Aldrich | L3908 | |
| α-酪蛋白 | Sigma-Aldrich | C6780 | |
| β-酪蛋白 | Sigma-Aldrich | C6905 | |
| κ-酪蛋白 | Sigma-Aldrich | C0406 | |
| 全脑裂解物 | Novus Biologicals | NB820-59177 | |
| 重组MOG | R&D Systems | 8535-MO-050 | |
| 重组MAG | Sino Biological | 13186-H08H | |
| 重组BTN1A1 | Acro Biosystems | BT1-H5222 | |
| 统计分析 | GraphPad Prism 8.0 | GraphPad Software, Inc. | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本收集与处理 | 血浆样本采集量、抗凝剂种类、稀释比例、PBMC分离方法、保存温度 阅读提示:Methods 2.1 Human plasma samples |
| 抗原包被 | 不同牛奶的稀释系列、包被浓度、纯化蛋白与重组蛋白的包被浓度、包被体积和孵育条件 阅读提示:Methods 2.2 Antigens and their composition, 2.3 Serial dilution and bicinchoninic acid assay, Table 3 |
| ELISA操作 | 血浆稀释度、封闭缓冲液成分与封闭时间、抗体浓度、孵育条件和洗涤次数 阅读提示:Methods 2.4 Enzyme-linked immunosorbent assay |
| 数据分析 | 正态性检验、非参数检验选择、相关性分析类型、显著性水平 阅读提示:Methods 2.5 Statistics |