EGPA和严重嗜酸性粒细胞性哮喘中自身抗原及其潜在翻译后修饰的鉴定

背景：严重嗜酸性粒细胞性哮喘（SEA）的慢性气道炎症提示可能存在自身免疫病因，具有与ANCA阳性EGPA中髓过氧化物酶（MPO）类似的未识别自身抗体。既往研究表明，蛋白质的氧化翻译后修饰（oxPTM）是自身抗体反应逃避免疫耐受的重要机制。SEA中针对oxPTM自身抗原的自身抗体此前尚未被研究。方法：招募EGPA和SEA患者以及健康对照者。自身抗原未知方法：将参与者血清与未刺激和PMA刺激的中性粒细胞和嗜酸性粒细胞玻片孵育，通过抗人IgG FITC抗体的免疫荧光鉴定抗粒细胞自身抗体。靶向自身抗原方法：从既往文献和FANTOM5基因集分析中鉴定嗜酸性粒细胞表达蛋白的候选蛋白。通过间接ELISA检测血清IgG自身抗体对这些蛋白天然形式和oxPTM形式的反应。结果：免疫荧光研究显示，已知ANCA患者的血清如预期那样对中性粒细胞产生IgG染色。此外，17名受试SEA患者中有9名的血清对经历NETosis的PMA刺激中性粒细胞产生IgG染色。嗜酸性粒细胞玻片的免疫荧光染色在所有参与者（健康者和嗜酸性粒细胞性疾病患者）的血清中均可见，呈弥漫性胞质染色，除一名SEA患者表现出细微的核染色。FANTOM5基因集分析鉴定出TREM1（髓样细胞上表达的触发受体1）和IL-1受体2（IL1R2）为嗜酸性粒细胞特异性靶点，用于测试自身抗体反应，此外还有从既往文献中鉴定的MPO、嗜酸性粒细胞过氧化物酶（EPX）和胶原蛋白V。间接ELISA发现，SEA患者血清中针对胶原蛋白V、MPO和TREM1的高浓度自身抗体比例高于健康对照。健康参与者和SEA参与者血清中均存在高浓度的抗EPX自身抗体。与天然蛋白相比，检查oxPTM时患者自身抗体ELISA阳性的比例并未增加。讨论：尽管所研究的靶蛋白均未显示出对SEA的高敏感性，但至少一种血清自身抗体阳性的患者比例较高，表明对自身抗体血清学进行更多研究有可能改善严重哮喘的诊断检测。临床试验注册：ClinicalTrials.gov，标识符NCT04671446。