样本采集与临床数据记录
收集2020年6-7月日本各地兽医诊所就诊猫的血液样本，并记录临床病史和饲养信息。
在101家兽医诊所经猫主人同意后采集血样，包括血清或血浆，同时通过问卷收集猫的饲养环境、去势状态、多猫饲养及近3个月临床体征。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
基于蛋白A/G的ELISA对日本猫SARS-CoV-2抗体的血清学调查
Guest edited collection serological study of SARS-CoV-2 antibodies in japanese cats using protein-A/G-based ELISA.
实验完整度
中研究包括方法开发、验证和血清学调查，但无独立的功能或机制验证实验。
主要模型
日本兽医诊所就诊的猫（n=1,969）
重点核对
样本采集时间：2020年6月1日至7月31日 样本类型：血清或血浆，来自101家兽医诊所 ELISA检测抗原：S1蛋白和RBD蛋白 中和抗体检测方法：蚀斑减少中和试验 阳性判定标准：ELISA cut-off为阴性对照均值+3 SD，中和试验中和滴度≥1:20
摘要
背景：关于日本猫中严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）的流行状况知之甚少，原因是缺乏在猫中易于使用的可靠的血清流行病学分析方法。结果：我们开发了一种基于蛋白A/G的酶联免疫吸附测定（ELISA）来检测猫中针对SARS-CoV-2的抗体。该测定使用针对SARS-CoV-2的阳性兔抗体进行标准化。ELISA结果与常规的抗猫免疫球蛋白G（IgG）ELISA结果一致。为了测试基于蛋白A/G的ELISA，我们收集了2020年6月至7月在日本兽医诊所就诊的1,969只猫的血液样本，并测定了抗SARS-CoV-2抗体的存在。发现9只猫具有SARS-CoV-2 S1特异性IgG，其中4只具有重组受体结合域特异性IgG。在这9个样本中，一个显示中和活性。基于这些发现，我们估计猫中SARS-CoV-2中和抗体的患病率为0.05%（1/1,969样本）。这一患病率与当时研究中日本人中SARS-CoV-2中和抗体的患病率一致。结论：基于蛋白A/G的ELISA可能成为测量猫中抗SARS-CoV-2抗体的标准化方法。日本猫中SARS-CoV-2的感染状况可能与人类中的感染状况相关。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 评估日本猫中SARS-CoV-2的感染流行状况，并开发适用于猫的血清学检测方法。
- 核心机制
- 猫中SARS-CoV-2感染状况可能与人类中的流行状况相关。
- 主要证据
- 基于蛋白A/G的ELISA检测1,969份猫血样，发现9份S1抗体阳性，4份RBD抗体阳性，其中1份具有中和活性，推测血清阳性率为0.05%，与人类血清阳性率无显著差异。
- 研究意义
- 开发了一种可广泛应用的猫SARS-CoV-2抗体筛查ELISA，并提示猫的感染状况可能反映人类疫情。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
开发基于蛋白A/G的ELISA
建立并验证一种用于检测猫SARS-CoV-2抗体的ELISA方法。
使用蛋白A/G偶联辣根过氧化物酶作为检测抗体，以重组S1蛋白和RBD蛋白为抗原，优化条件。通过比较与抗猫IgG ELISAs的结果验证。
ELISA筛选抗SARS-CoV-2抗体
初步筛查猫血清中SARS-CoV-2 S1和RBD特异性抗体。
对1,969份样本进行抗S1蛋白ELISA，阳性样本进一步检测抗RBD蛋白抗体。
中和抗体检测
确认ELISA阳性样本中是否含有SARS-CoV-2中和抗体。
对9份ELISA阳性样本进行蚀斑减少中和试验，测定中和滴度。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 样本采集 | 真空采血管 | Terumo | Vebnoject II |
| ELISA | 重组S1蛋白 | Acro Biosystems | S1N-C52H3 |
| 重组RBD蛋白 | Ray Biotech | 230-30162-100 | |
| 蛋白A/G偶联辣根过氧化物酶 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 抗S1兔多克隆抗体 | Genetex | GTX135356 | |
| 抗RBD兔单克隆抗体 | Sino Biological | 40592-R001 | |
| 中和试验 | 杜氏改良Eagle培养基 | -- | -- |
| 胎牛血清 | Bio West | -- | |
| 羧甲基纤维素 | -- | -- | |
| 结晶紫 | -- | -- | |
| 所有实验 | GraphPad Prism 9.0 | GraphPad Software Inc. | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本采集 | 样本采集时间（2020年6月1日至31日）、采集地点（101家兽医诊所）、样本类型（血清或血浆）、猫的年龄和性别分布 阅读提示：Methods: Collection of samples with clinical history and data pertaining to cat housing and husbandry; Table 1 |
| ELISA | 抗原包被浓度（S1 100 ng/孔，RBD 50 ng/孔）、样品稀释比例（1:100）、二抗稀释度（1:25,000）、封闭条件（0.5% BSA）、样本预反应条件（5%脱脂奶和10% FBS）、cut-off值（阴性对照均值+3 SD） 阅读提示：Methods: Detection methods for anti-SARS-CoV-2 antibodies in feline serum/plasma samples |
| 中和试验 | 病毒株（2019-nCoVJPN/TY/WK-521/2020）、细胞系（VeroE6/TMPRSS）、血清起始稀释度（1:20）、中和滴度判定标准（蚀斑减少≥50%） 阅读提示：Methods: Detection methods for anti-SARS-CoV-2 antibodies in feline serum/plasma samples; Table 2 |