利用VP40衍生肽变体对循环埃博拉病毒载量进行物种特异性定量

迄今为止报道了六种埃博拉病毒物种，包括人类病原体本迪布焦病毒（BDBV）、埃博拉病毒（EBOV）、苏丹病毒（SUDV）和塔伊森林病毒（TAFV）；非人类病原体雷斯顿病毒（RESTV）；以及可能的邦巴利病毒（BOMV）。由于不同物种引起的疾病严重程度存在差异，物种鉴定和病毒载量定量对于及时有效地治疗感染患者至关重要。在这里，我们开发了一种免疫沉淀耦合质谱（IP-MS）检测方法，用于VP40抗原的检测和定量。我们仔细选择了VP40的两个区域，从蛋白质序列中指定为肽8和肽12，这些区域在埃博拉病毒物种之间表现出微小变异，通过胰蛋白酶肽的MS分析和基于可用生物信息学工具的抗原性预测，并生成了对这些变异肽具有泛特异性的高质量捕获抗体。我们将该方法应用于掺入来自EBOV、SUDV和BDBV的重组VP40蛋白和病毒样颗粒（VLP）的人血浆，以及EBOV感染的NHP血浆。EBOV和SUDV（致死率最高的两个物种）之间的序列替换导致p8的亲和力变化2.6倍，p12的19倍。所提出的IP-MS检测方法通过结合p8和p12数据，在一次检测中区分六种已知EBV物种中的四种。使用多反应监测（MRM）作为信号读出的IP-MS检测方法的检测限（LOD）对于EBOV和SUDV分别确定为28 ng/mL和7 ng/mL，相当于约1.625–6.5×10^5 Geq/mL，与目前用于埃博拉监测的侧向层析免疫测定的LOD相当。IP-MS检测方法的两个肽也通过使用微型MALDI-TOF MS仪器的串联MS谱图进行鉴定，大大增加了在分散实验室中进行高特异性检测的可行性。