甲状腺功能障碍生物标志物甲状腺过氧化物酶自身抗体（TPO-Ab）在干血斑中的ELISA检测方法的开发与验证

背景：在过去的一个世纪里，富裕国家中过敏性和自身免疫性疾病的患病率一直在稳步上升。对此提出的一种解释是“老朋友假说”，该假说认为卫生状况改善、城市化及生活方式改变减少了对我们共同进化的寄生虫和微生物的暴露，导致免疫失调。然而，在传统生活人群中（他们暴露于更多寄生虫和病原体，如同我们进化过程中所遭遇的）的研究有限，部分原因是缺乏微创、适合现场使用的自身免疫性疾病生物标志物。因此，我们开发了一种基于干血斑（DBS）样本的ELISA方法，用于评估甲状腺过氧化物酶自身抗体（TPO-Ab）阳性，这是自身免疫性甲状腺疾病的指标。结果：我们使用Accubind抗甲状腺过氧化物酶检测系统对验证样本进行了筛选，这些样本包括来自182名成人的匹配指尖干血斑、静脉干血斑和血浆样本。在确认我们的验证样本中存在TPO-Ab阳性个体（n = 12）后，我们开发了一种间接ELISA法，用于测量单个3毫米干血斑打孔样本中的TPO-Ab水平。我们的检测方法对DBS样本的灵敏度和特异性范围分别为91.7%至100%和98.2%至98.8%，采用≥ 26 IU/mL的临界值。重复质量控制DBS打孔的批内可靠性为5.2%，而高、中、低DBS对照的批间可靠性范围为11.5%至24.4%。稀释线性范围在80%至120%之间，加标回收实验表明DBS基质不干扰TPO-Ab的检测。DBS样本在-28°C或-80°C储存时TPO-Ab水平保持稳定，但在22°C或37°C下存放的DBS样本中随时间下降。结论：我们开发了一种内部、独立于试剂盒的间接ELISA方法，基于干血斑确定个体的TPO-Ab阳性状态，这是一种经济有效的方法，在一系列研究环境中具有潜在应用。