非对称流场流分离与表面等离子体共振检测联用分析血液血清中的治疗性蛋白质

将表面等离子体共振（SPR）检测与非对称流场流分离（AF4）联用，为研究生物分离中活性组分（如血清和唾液）提供可能，包括评估可能聚集物种的活性。SPR与AF4的联用需要能够从分离图谱中选择组分并将其导向SPR。SPR与色谱类方法的结合还需要一种机制来再生固定在SPR传感器表面的受体。在最近的工作中，尺寸排阻色谱（SEC）与SPR的结合开创了一种成功的方法，用于生物样品中活性生物组分的鉴定、表征和定量。在本研究中，评估了使用AF4的方法，用于缓冲液和血清中的抗体曲妥珠单抗。本研究的特别目标是测试AF4与SPR结合用于检测和定量血液血清等复杂样品中蛋白质和聚集体的可行性。此外，研究中比较了HER-2受体的三种不同固定方法，包括（1）通过EDC/NHS直接结合，这是标准方法；（2）通过NTA-Ni-Histag复合物固定；（3）使用可再生的亲和素形式的生物素/亲和素连接化学。生物素-亲和素方法获得了最高的特异性活性，而NTA-Ni-Histag连接观察到最低的特异性活性。数据表明，AF4可以分离血液血清中的曲妥珠单抗单体和聚集体，SPR能够选择性监测洗脱。这对于使用AF4-SPR自动分析复杂生物样品是一个令人鼓舞的结果。