病例筛选与分类
确定纳入研究的CMV结肠炎病例,并区分阳性与可疑病例。
纳入2023-2024年Sheba医疗中心诊断的CMV结肠炎病例,根据初始切片中CMV阳性细胞数分为阳性(≥2个)或可疑(1个)。排除组织块不可用或阳性细胞数>25的病例。
Beyond the first cut: evaluating CMV IHC reliability in serial gastrointestinal biopsy sections
研究包含连续切片、重复IHC染色和统计检验,但样本量有限且未包含阴性对照模型。
胃肠道活检组织(石蜡包埋) CMV结肠炎患者样本
初始阳性病例中33.3%(7/21)至少一个切片转为阴性 初始阳性病例中33.3%(7/21)至少一个切片转为可疑 所有初始可疑病例至少一个切片转为阴性 Friedman检验显示连续切片间CMV阳性细胞计数差异显著(p=0.047) IHC使用Dako单克隆抗体(稀释1:25)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
确定纳入研究的CMV结肠炎病例,并区分阳性与可疑病例。
纳入2023-2024年Sheba医疗中心诊断的CMV结肠炎病例,根据初始切片中CMV阳性细胞数分为阳性(≥2个)或可疑(1个)。排除组织块不可用或阳性细胞数>25的病例。
评估不同组织深度CMV检测的可重复性。
对每个病例的原始FFPE组织块进行连续切片,获得6张4微米厚切片,加上初始切片共7张,每张均进行CMV IHC染色。
定量每张切片中CMV阳性细胞数,并观察不同切片间的变化。
由认证的胃肠病理学家审查所有染色切片,记录每个切片中CMV阳性细胞数,并通过数字扫描辅助标准化。
检验连续切片间CMV检测的变异性是否显著。
使用Friedman检验评估总体差异,Wilcoxon符号秩检验进行两两比较,并列出诊断转变频率。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 免疫组织化学 | Dako单克隆抗体 | Dako | -- |
| 数字扫描 | 飞利浦IntelliSite扫描仪 | Philips | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 病例选择 | 纳入标准:初始切片阳性(≥2个细胞)或可疑(1个细胞);排除标准:组织块不可用、剩余材料不足、初始切片阳性细胞>25 阅读提示:Methods - Case selection |
| 连续切片 | 每个病例取得6张连续切片,厚度4微米;抗体为Dako单克隆抗体,稀释1:25 阅读提示:Methods - Histological analysis and serial sectioning, Immunohistochemistry |
| IHC染色 | 使用标准化IHC方案,包括脱蜡、抗原修复等;抗体稀释1:25 阅读提示:Methods - Immunohistochemistry |
| 细胞计数 | 由1名认证胃肠病理学家计数;使用数字扫描辅助;计数标准为明确细胞核染色 阅读提示:Methods - CMV-positive cell identification, Digital scanning |
| 统计分析 | 使用Friedman检验评估总体差异,Wilcoxon符号秩检验进行两两比较 阅读提示:Methods - Data collection and analysis; Results - Variability of CMV-positive cells |