建立AP和UC共病小鼠模型
模拟根尖周炎与溃疡性结肠炎共病的病理状态,比较各组差异。
使用8周龄雄性ICR小鼠,通过双侧上颌第一、二磨牙髓腔置入LPS诱导AP,2周后给予1% DSS饮水(5天/周,循环4次)诱导慢性UC,对照组给予蒸馏水。
Apical Periodontitis May Exacerbate Ulcerative Colitis via Neutrophil Extracellular Trap-Mediated Systemic Inflammation and Intestinal Barrier Disruption in Mice
包含动物模型(AP诱导和慢性UC诱导)、组织学评分、免疫荧光、ELISA及16S rRNA菌群分析等多个独立层级,并进行了功能验证和机制探讨。
ICR小鼠AP+UC共病模型 脂多糖诱导的根尖周炎小鼠模型 葡聚糖硫酸钠诱导的慢性溃疡性结肠炎小鼠模型
AP诱导:双侧上颌第一、第二磨牙髓腔内置入含0.2 μL LPS(1 μg/μL)的无菌棉球,氧化锌暂封 UC诱导:1% DSS饮水5天,随后2天蒸馏水,循环4次 分组:32只8周龄雄性ICR小鼠随机分为Ctrl、AP、UC、AP+UC,每组8只 检测指标:DAI、结肠长度、HAI、血清CRP/IL-6/IL-10/IL-1β/IgG/NETs水平、肠道紧密连接蛋白及NETs免疫荧光、肠道菌群16S rRNA测序
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
模拟根尖周炎与溃疡性结肠炎共病的病理状态,比较各组差异。
使用8周龄雄性ICR小鼠,通过双侧上颌第一、二磨牙髓腔置入LPS诱导AP,2周后给予1% DSS饮水(5天/周,循环4次)诱导慢性UC,对照组给予蒸馏水。
比较AP对UC临床严重程度和组织损伤的影响。
监测体重、粪便性状和隐血,计算DAI;测量结肠长度;结肠组织H&E染色评估HAI。
评估AP对全身炎症和NETs水平的影响。
收集血清,使用ELISA检测CRP、IL-6、IL-10、IL-1β、IgG和NETs水平。
观察AP对肠道屏障完整性和NETs形成的影响。
结肠组织AB-PAS染色检测杯状细胞;免疫荧光检测ZO-1、Claudin和NETs(MPO/CitH3)。
探究AP对UC小鼠肠道菌群多样性和组成的影响。
收集粪便样本,提取DNA,扩增16S rRNA V3-V4区,Illumina平台测序,QIIME2分析α/β多样性、LEfSe差异菌属和功能预测。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| AP诱导 | 脂多糖 | Sigma-Aldrich | L6529-1MG |
| 组织学染色 | AB-PAS染色试剂盒 | LEAGENE | DG0007 |
| 免疫荧光封闭 | 正常山羊血清 | Solarbio | SL038 |
| 免疫荧光一抗 | 抗ZO-1抗体 | Thermo Fisher | 61-7300 |
| 抗Claudin抗体 | Abcam | ab211737 | |
| 免疫荧光二抗 | Alexa Fluor 488偶联山羊抗兔IgG | Huabio | HA1121 |
| 免疫荧光一抗 | 抗MPO抗体 | Huabio | EM1901-19 |
| 免疫荧光二抗 | Alexa Fluor 594偶联山羊抗小鼠IgG | Huabio | HA1126 |
| 免疫荧光一抗 | 抗CitH3抗体 | Abcam | ab281584 |
| 免疫荧光核染色 | 4',6-二脒基-2-苯基吲哚 | Solarbio | 28718-90-3 |
| ELISA | CRP、IL-6、IL-10、IL-1β、IgG ELISA试剂盒 | MULTI SCIENCES BIOTECH | -- |
| NETs ELISA试剂盒 | MEIMIAN Bio | MM-1183M1 | |
| 16S rRNA测序 | Phusion高保真PCR预混液 | New England Biolabs | M0531S |
| 通用DNA纯化试剂盒 | TIANGEN Biotech | DP214 | |
| NEB Next Ultra DNA文库制备试剂盒 | Illumina | E7370L | |
| Micro-CT | NEMO微型CT系统 | PINGSENG Healthcare | NMC-200 |
| Micro-CT分析 | Avatar软件 | PINGSENG Healthcare | Avatar3-2.0.11.0 |
| 光学显微镜 | 光学显微镜 | Nikon | Eclipse Ci-E |
| 相机 | 相机 | Canon | EOS 60D |
| 共聚焦显微镜 | 激光共聚焦显微镜 | Olympus | FV3000 |
| 荧光显微镜 | 荧光显微镜 | Olympus | BX53 |
| 图像分析 | ImageJ软件 | NIH | v1.54f |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | 小鼠品系(ICR)、年龄(8周)、性别(雄性)、体重范围;AP诱导的LPS浓度和体积;DSS浓度(1%)和给药周期(5天/2天,重复4次);AP诱导与DSS开始的间隔(2周) 阅读提示:方法2.1节 |
| 分组与样本量 | 分组数量(4组)、每组样本量(8只)、随机化方法;样本量计算依据(G*Power,80% power,p<0.05) 阅读提示:方法2.1节 |
| 疾病活动度评估 | DAI评分标准(体重下降、粪便性状、便血);结肠长度测量方法;HAI评分标准(组织损伤、炎症细胞浸润) 阅读提示:方法2.1节和2.3节 |
| 血清炎症因子和NETs检测 | ELISA试剂盒品牌和货号;血清制备条件(离心速度、时间、温度);检测指标(CRP、IL-6、IL-10、IL-1β、IgG、NETs) 阅读提示:方法2.5节 |
| 肠道屏障评估 | AB-PAS染色试剂盒;免疫荧光抗体稀释度(ZO-1 1:200、Claudin 1:200、MPO 1:100、CitH3 1:1800);抗原修复条件(高压加热121°C,2 min);封闭条件(10%正常山羊血清,37°C,30 min) 阅读提示:方法2.3节和2.4节 |
| 肠道菌群分析 | 粪便样本采集和保存条件;DNA提取方法(CTAB);PCR引物和条件;测序平台(Illumina,250 bp双端);生物信息学数据库(GREENGENES 13_8) 阅读提示:方法2.6节 |