穿孔素药理学抑制减轻小鼠自身免疫性糖尿病中CD8+ T细胞介导的β细胞破坏

目的/假说：CD8⁺ T细胞是1型糖尿病中β细胞破坏的关键介质，通过穿孔素/颗粒酶和Fas/Fas配体途径发挥作用。我们和其他人的研究证据表明，穿孔素在非肥胖糖尿病（NOD）小鼠中CD8⁺ T细胞介导的β细胞破坏中起主导作用。由于穿孔素是将促凋亡颗粒酶递送到靶细胞胞质中不可或缺的，因此药理学抑制穿孔素可能保护β细胞免受CD8+ T细胞的细胞毒性。这种策略将减缓β细胞丢失和自身免疫性糖尿病的进展。最近出现的小分子穿孔素抑制剂为验证这一假说提供了机会。方法：评估新型小分子穿孔素抑制剂SN34960在体外和体内保护非肥胖糖尿病小鼠β细胞免受自身反应性细胞毒性T淋巴细胞攻击的能力。结果：体外实验中，穿孔素抑制剂SN34960保护分离的胰岛免受CD8+ T细胞介导的破坏（p<0.001）。体内实验中，单次剂量的SN34960在16小时内使胰岛特异性葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基相关蛋白（IGRP）肽负载靶细胞的死亡减少约50%，与未负载肽的对照细胞相比（p<0.05）。此外，用穿孔素抑制剂治疗7天的糖尿病前期NOD小鼠，在抗PDL1阻断加速自身免疫攻击时，糖尿病发病率降低（91.2% vs 58.4%，p<0.05）。用SN34960进行药理学穿孔素抑制并未改变浸润胰腺的致病性细胞毒性T淋巴细胞的活化或分化状态；相反，其作用机制是特异性地阻断穿孔素在分泌到突触间隙后产生的膜破坏和促凋亡效应。结论/解释：我们的结果表明，药理学穿孔素抑制可能代表一种保护β细胞免受自身反应性CD8+ T细胞破坏的新方法。