建立HEV体外感染模型
验证JEG-3细胞对HEV的易感性并评估HEV感染诱导的凋亡。
用HEVcc（源自HEVp6/HEV3和Sar55/HEV1）感染JEG-3细胞，在不同时间点检测HEV RNA水平，并通过TUNEL实验和Western blot检测凋亡标志物。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
p38抑制剂SB203580抑制HEV感染并在怀孕兔模型中预防HEV相关不良妊娠结局
p38 Inhibitor SB203580 Inhibits HEV Infection and Prevents HEV-Related Adverse Pregnancy Outcomes in a Pregnant Rabbit Model
实验完整度
高包含体外细胞模型（JEG-3、Huh7）和体内怀孕兔模型，并进行了功能验证（SB203580处理、p38α敲除）和机制验证（p38通路、炎症、凋亡）。
主要模型
JEG-3人绒毛膜癌细胞系 Huh7人肝癌细胞系 HEV感染的怀孕兔模型 非怀孕兔感染模型
重点核对
妊娠兔经静脉接种5.0×10^6拷贝HEV SB203580以10 mg/kg腹腔注射，每周两次，从感染后7天开始，持续两周 SB203580在JEG-3细胞中对HEVp6/HEV3的IC50为3.36 μM，对Sar55/HEV1的IC50为2.00 μM SB203580在JEG-3细胞中的CC50为14.94 μM 怀孕兔模型中的对照组为腹腔注射5% DMSO
摘要
背景与目的：妊娠期戊型肝炎病毒（HEV）感染可导致严重的不良妊娠结局，包括死产、早产、流产、孕产妇死亡和垂直传播。利巴韦林或聚乙二醇干扰素-α的说明书外使用被证明对治疗HEV感染有效，但两者均禁用于孕妇。迫切需要一种安全有效的妊娠期HEV感染治疗方法。方法：我们使用JEG-3绒毛膜癌细胞研究p38-MAPK信号通路在HEV复制中的作用。用不同浓度的SB203580（一种选择性p38-MAPK抑制剂）处理细胞。为了进行体内验证，用SB203580治疗感染HEV的怀孕兔。测量HEV复制、细胞因子分泌、凋亡和病理变化。同时监测对妊娠结局（包括垂直传播）的影响。结果：在本研究中，使用感染HEV的绒毛膜癌细胞系JEG-3细胞模型，我们发现HEV感染显著改变了p38-MAPK信号通路的表达模式。SB203580在体外可以抑制HEV复制并减少促炎细胞因子的分泌和凋亡。使用感染HEV的怀孕兔模型进行的进一步体内验证也表明，妊娠期间SB203580治疗显著降低了粪便和血清中的病毒载量、促炎细胞因子的分泌以及胎盘组织中的凋亡。最重要的是，SB203580不仅安全，而且可以有效预防怀孕兔中HEV相关的不良妊娠结局以及HEV向幼兔的垂直传播。结论：这些结果表明p38抑制剂SB203580是一种有效的化合物，有潜力作为妊娠期HEV感染的治疗候选药物。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- p38抑制剂SB203580能否抑制HEV感染并预防HEV相关不良妊娠结局？
- 核心机制
- HEV感染激活p38-MAPK通路，上调IL-17等促炎细胞因子并诱导胎盘细胞凋亡；SB203580通过抑制p38通路，减少病毒复制、炎症和凋亡，从而改善妊娠结局。
- 主要证据
- 体外JEG-3细胞实验显示SB203580剂量依赖性地抑制HEV-1和HEV-3复制，降低IL-17和TGF-β mRNA水平及凋亡；体内怀孕兔模型显示SB203580降低粪便和血清病毒载量、促炎细胞因子和胎盘凋亡，并显著减少垂直传播和不良妊娠结局。
- 研究意义
- SB203580可能作为妊娠期HEV感染的潜在治疗候选药物，但需进一步的临床前安全评估和临床验证。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
验证p38通路激活
确定HEV感染是否激活JEG-3细胞中的p38-MAPK信号通路。
通过Western blot检测p38和p-p38蛋白水平，使用PCR array分析p38-MAPK通路相关基因表达，并检测炎症细胞因子（IL-17、TNF-α等）和IL-17RA的表达。
评价SB203580体外抗病毒活性
评估SB203580在JEG-3和Huh7细胞中对HEV复制的抑制作用及细胞毒性。
用不同浓度SB203580处理感染HEV的JEG-3和Huh7细胞，检测细胞内和细胞外HEV RNA水平，计算IC50和CC50，并通过CCK-8检测细胞活力。
验证p38α介导的抗病毒机制
确认SB203580的抗病毒作用是通过特异性抑制p38通路而非脱靶效应。
使用CRISPR-Cas9技术生成p38α敲除JEG-3细胞，比较敲除细胞和野生型细胞中HEV复制水平，并观察SB203580处理是否进一步抑制病毒复制。
建立HEV感染怀孕兔模型
建立怀孕兔HEV感染模型，以验证体内HEV感染对妊娠结局的影响和垂直传播。
怀孕兔经静脉接种HEV（兔HEV株，GenBank: JQ768461），监测病毒学标志物（粪便排毒、病毒血症、抗原血症、抗体血清转换）、肝功能（ALT/AST）、组织病理学变化及妊娠结局。
评价SB203580对怀孕兔的治疗效果
评估SB203580在怀孕兔体内对HEV感染和妊娠结局的影响。
感染HEV的怀孕兔从感染后7天开始，每周两次腹腔注射SB203580（10 mg/kg，溶于5% DMSO），持续两周。检测病毒载量、炎症细胞因子、组织病理学变化、不良妊娠结局和垂直传播。
比较SB203580与利巴韦林在非怀孕兔中的效果
评估SB203580在非怀孕兔中的抗病毒效果，并与利巴韦林进行比较。
非怀孕兔感染HEV后，分别用SB203580（腹腔注射10 mg/kg，每周两次）、利巴韦林（口服30 mg/kg/天）或安慰剂处理，监测病毒学标志物和肝功能。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物实验 | SB203580 | MCE | -- |
| 细胞培养 | 杜氏改良Eagle培养基 | -- | -- |
| 最低必需培养基 | -- | -- | |
| 胎牛血清 | -- | -- | |
| RNA转录 | Ambion mMESSAGE mMACHINE体外RNA转录试剂盒 | Life Technologies Corporation | -- |
| 转染 | Lipofectamine MessengerMAX mRNA转染试剂 | Invitrogen | -- |
| 细胞凋亡检测 | TUNEL检测试剂盒 | -- | -- |
| 细胞活力检测 | 细胞计数试剂盒-8 | -- | -- |
| 细胞培养 | 利巴韦林 | -- | -- |
| 统计分析 | SPSS PASW Statistics v18.0统计学软件 | SPSS Inc. | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 体外细胞感染 | JEG-3细胞数量：2×10^4；感染剂量：5.0×10^6拷贝HEVcc；感染时间：16小时；检测时间点：0、24、48、72小时 阅读提示：Methods部分：HEV In Vitro Transfection and Infection |
| SB203580处理 | SB203580浓度：0、0.5、1、2 μM；处理时间：感染后24、48、72小时 阅读提示：Results部分：p38 Inhibitor SB203580 Inhibits HEV Infection in JEG-3 Cells |
| 怀孕兔模型 | 兔龄：7个月；分组：HEV、Mock、SB、PC，每组6只；接种剂量：5.0×10^6拷贝HEV（静脉注射）；SB203580剂量：10 mg/kg腹腔注射，每周两次，从感染后7天开始，持续两周；对照组：5% DMSO腹腔注射 阅读提示：Methods部分：Animal Experiments；Figure 5A |
| 非怀孕兔模型 | 兔龄：3个月；分组：LS、LR、LP，每组6只；接种剂量：5.0×10^6拷贝HEV（静脉注射）；SB203580剂量：10 mg/kg腹腔注射每周两次；利巴韦林剂量：30 mg/kg口服每日；监测时间：8周 阅读提示：Methods部分：Animal Experiments；Figure 6C |