体内抗肿瘤活性筛选
评估vobra duo在多种儿童实体瘤异种移植模型中的抗肿瘤活性，并与对照ADC SYD988比较。
使用不同设计（SMT或队列）评估vobra duo和SYD988在骨肉瘤、神经母细胞瘤、尤文肉瘤、RMS、肝母细胞瘤、肾母细胞瘤和MRT模型中的疗效，记录肿瘤体积变化和事件发生，计算ORR和EFS。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
B7-H3靶向抗体药物偶联物Vobramitamab Duocarmazine在儿童实体瘤中的临床前活性
Preclinical Activity of the B7-H3-Targeting Antibody-Drug Conjugate Vobramitamab Duocarmazine in Pediatric Solid Tumors
实验完整度
高包含多肿瘤类型异种移植模型（细胞系来源及患者来源）、体内疗效评估、蛋白表达分析、RNA测序及机制探索，具备两个及以上独立证据层级。
主要模型
儿童实体瘤异种移植模型（包括骨肉瘤、神经母细胞瘤、尤文肉瘤、横纹肌肉瘤、肝母细胞瘤、肾母细胞瘤和恶性横纹肌样瘤） 患者来源异种移植模型（PDX）
重点核对
单次腹腔注射vobra duo 6 mg/kg 对照ADC SYD988（抗CD20，6 mg/kg） 肿瘤体积倍增时间（4倍）作为事件定义 治疗起始时肿瘤体积约0.05-0.3 cm³ 不同肿瘤模型使用的样本量（如骨肉瘤每组10只，其他模型5或2只）
摘要
目的：Vobramitamab duocarmazine (vobra duo)是一种基于多卡霉素的人源化抗体药物偶联物(ADC)，靶向B7-H3，药物抗体比约为2.7。Vobra duo在多种成人癌症模型中显示出强大的抗肿瘤活性，并在食蟹猴中具有良好的药代动力学和安全性。I/II期临床试验(NCT03729596)的早期结果显示，在转移性去势抵抗性前列腺癌患者中具有可控的毒性和令人鼓舞的客观缓解。鉴于B7-H3在儿童实体瘤中的高表达，该靶点正成为儿童肿瘤学中一个令人信服的治疗机会。实验设计：在儿童实体瘤异种移植模型中评估了vobra duo的抗肿瘤活性，包括尤文肉瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤、恶性横纹肌样瘤、肝母细胞瘤和肾母细胞瘤。荷瘤小鼠接受单次腹腔注射vobra duo(6 mg/kg)或匹配的对照ADC(SYD988，抗CD20 ADC，具有相同的连接子和载荷)。肿瘤进展定义为肿瘤体积增加四倍。使用Kaplan-Meier方法分析无事件生存期，客观缓解分为部分缓解、完全缓解和持续完全缓解。结果：Vobra duo在多种肿瘤类型中诱导了客观缓解，而对照ADC显示出有限的活性。未观察到B7-H3蛋白表达与治疗反应之间的明确关联。结论：这些发现证明了vobra duo在儿童实体瘤中的广泛临床前疗效，并支持在儿童中进一步临床研究B7-H3靶向疗法。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- vobra duo在多种儿童实体瘤异种移植模型中是否具有抗肿瘤活性？
- 核心机制
- vobra duo通过靶向B7-H3介导内吞，释放duocarmycin载荷，导致DNA烷基化和细胞毒性，同时下调B7-H3和VEGFA表达。
- 主要证据
- 在7种儿童肿瘤类型的异种移植模型中，vobra duo诱导了客观缓解，包括多个MCR和PR，而对照ADC SYD988活性有限；Wilms肿瘤、骨肉瘤和RMS的ORR超过50%。
- 研究意义
- 这些发现支持B7-H3靶向ADC在儿童实体瘤中的临床研究，尤其是vobra duo在B7-H3表达肿瘤中的应用。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
CD276 mRNA表达分析
评估各肿瘤模型中CD276 mRNA表达水平，并探讨其与vobra duo抗肿瘤活性的潜在关联。
利用RNA-seq数据（包括MRT、肝母细胞瘤、肾母细胞瘤）和pedcBioPortal数据库分析CD276 mRNA表达（FPKM），并比较反应组与非反应组的表达差异。
B7-H3蛋白表达分析
评估各肿瘤模型中B7-H3蛋白表达水平，并分析其与治疗反应的关系。
通过Western blot和免疫组织化学（IHC）检测B7-H3蛋白表达，包括膜表达和血管表达，并计算H-score。
VEGFA蛋白水平检测
评估vobra duo处理对肿瘤中VEGFA蛋白表达的影响，探索其药效学作用。
通过ELISA检测BT-16和WT-12模型中vobra duo或SYD988处理后的VEGFA蛋白水平。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物实验 | vobramitamab duocarmazine（vobra duo） | MacroGenics, Inc. | -- |
| SYD988 | MacroGenics, Inc. | -- | |
| 蛋白质提取 | RIPA裂解缓冲液 | Thermo Fisher Scientific | 89900 |
| 蛋白酶和磷酸酶抑制剂 | Thermo Fisher Scientific | A32961 | |
| 蛋白质定量 | BCA蛋白测定试剂盒 | Bio-Rad | 5000002EDU |
| Western blot | SDS上样缓冲液 | Invitrogen | NP0007 |
| 10% Bis-Tris凝胶 | Invitrogen NuPAGE | NP0302BOX | |
| Immobilon-FL PVDF膜 | Millipore | IPFL00005 | |
| iBlot转印系统 | -- | -- | |
| 抗B7-H3抗体（AF1027） | R&D Systems | AF1027 | |
| 抗GAPDH抗体（2118） | Cell Signaling Technology | 2118 | |
| LI-COR IRDye 680RD抗小鼠二抗 | LI-COR Bio | 925-68070 | |
| LI-COR IRDye 800CW抗山羊二抗 | LICORBio | 925-32211 | |
| LI-COR Odyssey封闭缓冲液（TBS） | -- | -- | |
| LI-COR Odyssey CLx成像系统 | LI-COR | -- | |
| ELISA | 人VEGF ELISA试剂盒 | Abcam | ab100663 |
| SpectraMax M5微孔板读数仪 | Molecular Devices | -- | |
| 免疫组织化学 | 山羊抗人B7-H3多克隆抗体 | R&D | HCM422061 |
| RNA-seq | KAPA链特异性RNA-seq样本制备试剂盒 | KAPA Biosystems | -- |
| Illumina NovaSeq 6000测序仪 | Illumina | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 体内抗肿瘤活性评估 | 模型类型和来源、样本量、给药剂量（6 mg/kg）、给药途径（腹腔注射）、给药次数（单次）、肿瘤体积测量频率和事件定义 阅读提示：Materials and Methods: Xenograft models, In vivo testing |
| CD276 mRNA表达分析 | RNA-seq平台、定量方法（RSEM）、统计检验方法 阅读提示：Materials and Methods: RNA sequencing, bioinformatics, and statistical analyses |
| B7-H3蛋白表达分析 | 抗体克隆、稀释度、组织裂解方法、蛋白定量方法 阅读提示：Materials and Methods: Protein extraction, Western blotting, ELISA, and immunohistochemistry assays |
| VEGFA蛋白水平检测 | ELISA试剂盒型号、处理剂量和时间点（6小时和48小时）、统计方法 阅读提示：Materials and Methods: Protein extraction, Western blotting, ELISA, and immunohistochemistry assays; Results: B7-H3 protein expression |