“盲区”活动：为什么理解哪些蛋白酶是活性的，而不仅仅是存在，对于严谨的骨关节炎研究至关重要

目标：蛋白酶是骨关节炎（OA）中关节软骨破坏的关键驱动因素。大多数研究通过测量RNA或蛋白质丰度来推断蛋白酶的参与，尽管蛋白酶除了其活性形式外，还可以存在于多种非活性状态。本综述探讨了OA研究中的一个关键“盲区”：经常假设蛋白酶的存在等同于蛋白水解活性。我们强调为什么理解哪些蛋白酶在何时何地具有活性，对于严谨的机制见解和转化进展至关重要。设计：这篇叙述性综述综合了软骨和滑液的生化、功能和蛋白质组学研究证据，以检查OA中蛋白酶活性的调节。我们总结了混淆基于丰度测量的解释的蛋白酶分子状态，并批判性评估了用于评估历史和当前蛋白水解活性的既定和新兴方法。这些方法包括新表位抗体、降解组学、荧光肽底物、酶谱法和基于活性的探针，重点介绍了它们的优势、局限性和应用。结果：累积的证据表明，在OA中，蛋白酶丰度与蛋白水解活性之间经常存在分离。蛋白酶激活、内源性抑制剂抑制、内吞清除和蛋白水解失活，各自决定净蛋白水解活性，但这些在常规转录组学、抗体或蛋白质组学方法中基本上是看不见的。以活性为重点的研究揭示，OA关节中的蛋白水解景观比以前认识的更广泛、更异质。结论：OA中的关节破坏不仅受蛋白酶表达控制，还受严格调控的空间和时间激活控制。因此，基于丰度的测量可能会大大高估功能性蛋白水解。更加强调直接或代理的活性测量——概念化为蛋白酶“活性组”——将加强实验解释，改善疾病分层，并支持基于活性的生物标志物和治疗策略的发现。关键词：蛋白酶，活性，细胞外基质，软骨，骨关节炎