加拿大不列颠哥伦比亚省家禽养殖场中分离的奥司他韦耐药性A(H5N1) 2.3.4.4b分支D1.1基因型变异株的表征

高致病性禽流感A(H5N1)病毒2.3.4.4b分支D1.1基因型导致了家禽中的广泛暴发，并持续引起散发性、有时严重的人类感染。本研究表征了2024年秋季加拿大不列颠哥伦比亚省农场出现的一株野生型(WT) A(H5N1) D1.1分离株(BC-H5N1-WT)及其H275Y神经氨酸酶(NA)变异株(BC-H5N1-H275Y)。体外分析评估了其在MDCK细胞中的复制动力学，通过TCID50和qRT-PCR对感染后不同时间点的上清液进行滴定。通过NA抑制试验评估神经氨酸酶抑制剂(NAI)敏感性，通过空斑减少试验评估对巴洛沙韦酸(BXA)的敏感性。在BALB/c小鼠中通过感染系列10倍稀释的病毒评估体内毒力，监测体重下降和死亡率。感染后第4天对肺、脑、鼻、肾、脾和心脏中的病毒滴度进行定量。BC-H5N1-WT病毒对测试的四种抗病毒药物均敏感，而BC-H5N1-H275Y对奥司他韦和帕拉米韦表现出耐药性，但对扎那米韦和BXA仍保持敏感。在所有测试时间点，BC-H5N1-WT的病毒复制滴度均显著高于BC-H5N1-H275Y，并显示出更大的空斑尺寸。在小鼠中，BC-H5N1-WT毒力更强，其LD50值为1.78 × 10^3 PFU，而BC-H5N1-H275Y为8.71 × 10^4 PFU，并且在肺和其他器官中产生更高的病毒滴度。尽管耐药性H5N1 D1.1变异株的适应度降低，但其在没有病毒选择压力的情况下出现，强调了持续监测的必要性。