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阿尔茨海默病患者小胶质细胞中GPR34表达保持稳定
Expression of GPR34 in microglia remains stable in human Alzheimer's disease
摘要
小胶质细胞是人类中枢神经系统的常驻免疫细胞，在发育、稳态和疾病中发挥关键作用。这些功能由广泛的细胞表面受体介导，包括G蛋白偶联受体，如ADP受体P2Y12和溶血磷脂酰丝氨酸受体GPR34。虽然GPR34缺乏与小胶质细胞吞噬功能受损有关，但其在阿尔茨海默病（AD）中与β-淀粉样蛋白（Aβ）和tau病理相关的调控尚不清楚。我们对AD谱系中老年人体和组织捐赠者的颞叶内侧皮层（MTLC）小胶质细胞密度、形态和GPR34表达进行了定量分析。使用荧光原位杂交和免疫标记，我们分析了187,670个小胶质细胞，并将小胶质细胞参数与Aβ斑块和tau包涵体的严重程度及空间邻近性相关联。同时，我们分析了来自236,002个细胞的人类单核RNA测序数据，以评估GPR34表达在小胶质细胞亚型、脑区和神经病理阶段间的差异。MTLC的小胶质细胞密度和总体形态在很大程度上得以保留，与局部Aβ或过度磷酸化tau负荷无关。除了在Aβ斑块紧邻区域观察到小胶质细胞突起适度缩短外，未检测到一致的病理相关形态变化。GPR34表达表现出明显的细胞间变异性，并因小胶质细胞亚型和脑区而异，但无论是表达强度还是GPR34阳性小胶质细胞的比例，均未与Braak分期或Thal期呈现一致的相关性。这些发现表明，人类小胶质细胞中GPR34的调控高度依赖于环境，并由区域和细胞异质性塑造，而非仅由AD相关病理决定。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| Axioscan 7扫描仪 | Carl Zeiss Microscopy GmbH | -- |
| HybEZ™ II手动杂交系统 | ACD | -- |
| RNAscope™多重荧光检测试剂盒 v2 | ACD | 323100 |
| Opal 570染料 | Akoya Biosciences | SKU FP1488001KT |
| RNAscope™ Hs-GPR34探针 | ACD | 521021 |
| 单克隆重组Iba1抗体 | Synaptic Systems | 234 308 |
| 磷酸化tau单克隆抗体 (AT8, Ser202, Thr205) | Thermo Fisher Scientific | MN1020 |
| 抗β-淀粉样蛋白单克隆抗体 | Sigma-Aldrich | A8354 |
| 生物素化二抗 (山羊抗小鼠IgG) | -- | -- |
| ExtrAvidin-过氧化物酶 | -- | -- |
| Alexa Fluor 647山羊抗豚鼠 | -- | -- |
| Alexa Fluor 488山羊抗小鼠 | -- | -- |
| Roti®Histofix固定液 | Carl Roth | -- |
| 正常山羊血清 | -- | -- |
| 牛血清白蛋白 | -- | -- |
| Triton X-100 | -- | -- |
| 柠檬酸盐缓冲液 | -- | -- |
| 过氧化氢 | -- | -- |
| 磷酸盐缓冲盐水 | -- | -- |
| RNAscope 1X靶标修复试剂 | ACD | -- |
| DAPI | -- | -- |
| TrueBlack | -- | -- |
| Dako荧光封片剂 | -- | -- |
| DAB | -- | -- |
| 二甲苯 | -- | -- |
| 乙醇 | -- | -- |
| 甲醛 | -- | -- |
| 石蜡 | -- | -- |
| 尼氏染色剂 | -- | -- |