转座子注释与基因组分布分析
构建非冗余的Ectocarpus转座子库并分析其在基因组中的分布。
使用RepeatModeler进行从头注释,对高丰度转座子进行人工校正,结合RepeatMasker映射和Tandem Repeats Finder识别串联重复,统计转座子在不同基因组区域的密度。
Characterization of the transposable element landscape shaping the Ectocarpus genome
包含基因组注释、比较基因组学分析、sRNA-seq、ChIP-seq和RNA-seq等多层次数据,并结合人工转座子注释与功能验证。
褐藻Ectocarpus sp. 7(雄性单倍体品系Ec32) 雄性配子体(营养期、可育期)和配子
基因组组装版本:Ectocarpus v5(基于雄性单倍体品系Ec32) sRNA-seq的生物学重复:营养配子体(S1-S3)、可育配子体(S4-S6)各三个重复,配子(S7-S8)两个重复 H3K79me2 ChIP-seq数据来源:雄性配子体,并与H3对照进行log2比值计算 TE完整性定义:与共识序列分歧<20%且覆盖共识序列长度>80% TE差异sRNA分析中使用DESeq2,过滤标准为所有样品中至少10个reads
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
构建非冗余的Ectocarpus转座子库并分析其在基因组中的分布。
使用RepeatModeler进行从头注释,对高丰度转座子进行人工校正,结合RepeatMasker映射和Tandem Repeats Finder识别串联重复,统计转座子在不同基因组区域的密度。
分析Ectocarpus生命周期不同阶段与转座子相关的小RNA表达谱。
从营养配子体、可育配子体和配子中提取总RNA,构建sRNA文库并进行Illumina测序。
定量转座子上的小RNA积累并鉴定差异积累。
对sRNA reads进行质控、长度过滤(20-24 bp)和比对,使用featureCounts量化CPM,用DESeq2进行差异表达分析。
检测H3K79me2在转座子上的分布及其与TE表达的关系。
使用公开的H3K79me2 ChIP-seq数据,比对到参考基因组,计算log2(IP/H3)比值,鉴定H3K79me2峰并与TE注释重叠,分析TE基因表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| RNA提取 | TURBO DNase试剂盒 | Thermo Fisher Scientific | AM1907 |
| RNA纯化 | RNA清洁和浓缩试剂盒 | Zymo Research | R1013 |
| sRNA文库制备 | NEBNext多重小RNA文库制备试剂盒 | New England Biolabs | -- |
| sRNA文库大小选择 | BluePippin 3%琼脂糖卡匣 | Sage Science | -- |
| 测序 | Illumina NextSeq2000测序仪 | Illumina | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 藻株培养和样本收集 | 培养温度14°C,光周期12h/12h,营养配子体培养约2周,可育配子体培养4-5周,配子收集约1500个配子体,生物学重复数(营养和可育配子体各3个,配子2个) 阅读提示:Methods:Algae strains and growth conditions |
| sRNA文库制备 | 起始RNA量1 µg,DNase处理20分钟,RNA纯化柱洗涤步骤(2次Prep buffer和4次Wash Buffer),PCR循环数15,片段大小选择(BluePippin 3%琼脂糖卡匣) 阅读提示:Methods:sRNA library preparation and short-read sequencing |
| sRNA数据分析 | 长度过滤(20-24 bp),比对参数(bowtie1,-v 0,-m 1),多匹配reads保留,CPM计算参数(featureCounts,countMultiMappingReads=TRUE),差异分析使用DESeq2,过滤标准(所有样品至少10个reads) 阅读提示:Methods:sRNA-sequencing analysis |
| ChIP-seq分析 | ChIP-seq数据来源(SRA数据库,雄性配子体),比对允许多匹配,归一化方法(log2(IP/H3)),峰检测(MACS2 --broad),TE表达量化(TEspeX) 阅读提示:Methods:Chip-seq mapping and analysis |