评估三维（3D）病理学组织处理流程对下游分子分析的影响

目的：近年来出现的非破坏性三维（3D）病理学方法有潜力通过大幅增加成像采样组织量并提供体积形态学背景，来增强标准的二维组织病理学。另一个关键优势是组织保持完整，可在成像后重新包埋，用于潜在的长期储存及未来的组织学或分子分析。本研究旨在系统评估3D病理学方案对生物分子（包括DNA、RNA和蛋白质）的影响及其与下游检测的兼容性。材料和方法：我们将一个先前优化的3D病理学方案——包括脱蜡、荧光苏木精-伊红类似物染色、光学透明化和开顶式光片显微镜——应用于乳腺癌、前列腺癌和头颈癌的福尔马林固定石蜡包埋标本。按照该方案处理后，组织被重新包埋在石蜡中，并与未经过3D病理学处理的配对福尔马林固定石蜡包埋对照进行比较。提取DNA和RNA并进行质量评估。通过管家基因的PCR和实时逆转录定量PCR检测扩增能力。结果：与对照组相比，3D病理学处理组的DNA和RNA平均产量略有下降且片段化增加，但PCR扩增能力基本得以保留。对PCR产物的桑格测序证实了准确的序列测定，而总RNA测序表明整体转录组谱基本未变。常见生物标志物的免疫组织化学染色产生了可比的信号，表明3D病理学流程后这些蛋白质得以保留。结论：这些结果证明了将3D病理学与下游分子分析相结合的基本可行性，为未来进一步探索3D病理学与多种先进分子检测的整合提供了依据。