效应性T细胞在角膜移植失败中促进纤维化形成

目的：评估纤维化是否参与角膜移植失败，并确定角膜移植排斥的关键免疫细胞——效应性CD4+ T细胞是否在纤维化形成中发挥直接作用。方法：在小鼠中进行同种异体角膜移植。通过裂隙灯生物显微镜评估移植片混浊度，通过活体共聚焦显微镜评估纤维化。通过实时PCR和免疫组织化学评估接受和失败移植片中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。使用流式细胞术评估移植片浸润的CD4+ T细胞、中性粒细胞和巨噬细胞的频率。在体外，将MK/T-1角膜成纤维细胞与从角膜移植受体小鼠分离的活化CD4+CD25-效应性T细胞共培养，并通过实时PCR和ELISA定量α-SMA表达。使用中和抗体评估干扰素-γ（IFN-γ）在促进α-SMA表达中的作用。结果：大多数失败的移植片表现出纤维化的临床体征，在角膜移植后第6周最为明显。与接受的移植片相比，失败的移植片显示出更高的α-SMA表达。流式细胞术分析显示，与接受的移植片相比，失败移植片中CD4+ T细胞显著增加。活化的CD4+CD25-效应性T细胞与角膜成纤维细胞共培养导致成纤维细胞α-SMA表达增加。与免疫球蛋白G对照相比，培养物中IFN-γ的抑制显著抑制了α-SMA表达的增加。结论：纤维化导致角膜移植失败中的移植片混浊，并且至少部分由效应性CD4+ T细胞通过IFN-γ介导。