Foamy microglia link oxylipins to disease progression in multiple sclerosis
整合人类死后MS病变的脂质组学、转录组学、蛋白质组学、化学蛋白质组学和组织学分析，并在小鼠脱髓鞘模型中进行功能验证（MAGL抑制），涵盖体外分子机制和体内疗效。
人类死后MS白质病变（包括活动性、混合活动性/非活动性、非活动性和再髓鞘化病变） LPC诱导的小鼠脊髓局灶性脱髓鞘模型 C57BL/6JRj小鼠
人类样本：28例继发进展型MS和10例对照，共110个白质样本，58个病变 LPC注射剂量：1% LPC（Sigma, L4129）1 μl注射至小鼠脊髓T10-T12 MAGL抑制剂RO7232432（MAGLi-432）剂量：5 mg/kg，每日腹腔注射，从LPC注射后第2天开始 ABPP使用FP-biotin和THL-biotin探针，浓度为10 μM 统计阈值：FDR<10%（BH校正）
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
根据小胶质细胞/巨噬细胞形态（泡沫状 vs 非泡沫状）对活动性（AL）和混合活动性/非活动性（ML）病变进行亚分类，并评估其与临床进展的关联。
从28例SPMS和10例对照的110个白质样本中，对58个病变进行PLP1、HLA-DR/DQ/DP、GFAP、CD79A、CD3染色，定义泡沫状细胞为HLA+且具有空泡细胞质的细胞，并统计其比例；将病变比例与EDSS6/8时间、疾病持续时间等临床参数进行关联分析。
检测不同病变类型的脂质组成，特别是泡沫状病变是否具有独特的脂质谱。
使用靶向LC-MS/MS对100个病变/正常样本进行脂质组学分析，检测712种脂质，并量化差异丰度脂质；用Oil Red O染色验证中性脂质积累。
鉴定泡沫状病变的基因表达和蛋白质特征，并确定驱动泡沫表型的生物网络。
对105个样本进行bulk RNA-seq，对100个样本进行蛋白质组学；使用WGCNA鉴定基因模块，通过蛋白质水平验证关键模块；进行单核RNA-seq数据反卷积和基因集变异分析评估细胞类型和微胶质细胞状态。
整合脂质组学、转录组学和蛋白质组学，识别与泡沫状病变和疾病进展相关的潜在分子轴。
使用MOFA进行多组学因子分析，获得7个因子；因子3与泡沫状病变、CE、BMP、氧化脂质、IgG1、C1QC、FCGR2B等相关，并与疾病进展（EDSS6/8时间更短）显著关联；进行Slingshot伪时间轨迹分析。
鉴定泡沫状病变中活性升高的酶，特别是与脂质代谢相关的酶，并验证MAGL作为潜在治疗靶点。
使用氟膦酸盐和β-内酯探针进行ABPP，鉴定97种活性水解酶；MAGL活性在泡沫状ML中显著升高；通过RNAscope验证MGLL在泡沫状病变中的表达；使用LEI-463-Cy5荧光探针可视化MAGL活性；在LPC诱导的脱髓鞘小鼠模型中，从LPC注射后第2天开始每天给予MAGL抑制剂RO7232432（5 mg/kg），评估病变恢复。
评估脑脊液（CSF）中氧化脂质水平是否与脑内泡沫状病变比例相关，探索作为疾病进展生物标志物的可能性。
对同一队列的CSF样本进行脂质组学分析（仅信号脂质平台），测量氧化脂质和前列腺素水平，并将其与供体脑中泡沫状病变比例进行关联分析。
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 人类样本收集 | 供体数量、诊断、死后延迟、CSF pH、样本类型（WM病变或对照） 阅读提示：Methods: Human brain tissue |
| 病变分类 | 病变亚型定义（AL、ML、IL、RL）及泡沫状/非泡沫状形态判定标准 阅读提示：Methods: Lesion characterization and definitions |
| 脂质组学 | 样本数量（100个）、脂质种类（712种）、LC-MS/MS平台、数据处理（limma） 阅读提示：Methods: Lipidomics sample preparation; Supplementary Methods |
| RNA-seq | 样本数量（105个）、测序平台（NovaSeq 6000）、比对和差异表达方法（edgeR, voom, limma） 阅读提示：Methods: RNA-seq and analysis |
| 蛋白质组学 | 样本数量（100个）、LC-MS/MS设置（EvoSep One, Exploris 480）、数据分析（DIA-NN） 阅读提示：Methods: Proteomics sample preparation; LC-MS/MS analysis proteomics |
| ABPP | 探针（FP-biotin, THL-biotin）浓度、样本数量（105个）、数据处理（MaxQuant） 阅读提示：Methods: Chemical proteomics (ABPP) sample preparation; Data analysis ABPP |
| 细胞因子分析 | 检测试剂盒（LXSAHM-26）、样本处理（25 μl 1 mg/ml裂解液）、检测平台（FLEXMAP 3D） 阅读提示：Methods: Cytokine profiling |
| LPC小鼠模型 | 小鼠品系（C57BL/6JRj）、年龄（14周）、LPC浓度（1%）、注射体积（1 μl）、注射部位（T10-T12）、术后镇痛 阅读提示：Methods: LPC spinal cord injection in mice; Extended Data Fig. 10 |
| MAGL抑制治疗 | MAGL抑制剂（RO7232432）剂量（5 mg/kg）、给药途径（腹腔）、开始时间（LPC后第2天）、持续时间 阅读提示：Methods: RO7232432 treatment |
| CSF脂质组学 | CSF样本体积（300 μl）、内标添加、信号脂质平台（氧化脂质和前列腺素） 阅读提示：Methods: CSF lipidomics |
