利用支气管肺泡灌洗液来源的细胞外囊泡检测接受抗逆转录病毒治疗的HIV患者的内皮损伤

我们通过顺序离心从无细胞的支气管肺泡灌洗液中分离出细胞外囊泡，并如前所述进行分析。对于囊泡表面蛋白鉴定，将分离的囊泡吸附到固定在链霉亲和素包被板上的生物素化抗体上，并用FITC标记的抗CD3抗体染色。为了离体测定内皮细胞凋亡，在人肺微血管内皮细胞中测量了caspase-3/7活性。使用VE-Cadherin启动子在内皮中表达Nef的转基因小鼠，用于体内内皮细胞凋亡表征。对于体内凋亡检测，用I型胶原酶消化小鼠肺组织，用表面谱系标记物（CD31、CD326和CD45）和应激标记物（EMAPII和cleaved caspase-3）染色，并使用流式细胞术进行分析。对于统计分析，样本进行去标识化处理，使用Graphpad Prism v.10软件，通过单因素方差分析结合事后检验或经Welch校正的学生t检验评估组间差异。