GLP1-E2疗法延缓晚期糖尿病前期NOD小鼠的自身免疫性糖尿病，并增强低剂量抗CD3疗法的疾病保护作用

目的/假说：抗CD3单克隆抗体（aCD3）通过调节自身免疫活性，延缓高危个体向3期1型糖尿病的进展。然而，应答仍然多变且短暂，治疗仅提供间接的β细胞保护。我们研究了胰高血糖素样肽-1-17β-雌二醇偶联物（GLP1-E2），一种靶向β细胞的融合化合物，能否增强短程低剂量aCD3疗程在NOD小鼠中预防自身免疫性糖尿病的作用。我们假设同时靶向免疫失调和β细胞脆弱性将提供互补且可能协同的益处，从而比任一单药治疗产生更持久的保护。方法：将晚期糖尿病前期的雌性NOD小鼠随机分为四组：未治疗对照组、aCD3单药治疗组、GLP1-E2单药治疗组和联合治疗组。aCD3以2.5 µg/天静脉注射，连续5天，而GLP1-E2以100 nmol kg−1 day−1皮下注射，持续18周。对小鼠进行纵向监测以评估糖尿病发病。通过空间转录组学和免疫染色分析胰腺，以评估免疫浸润、β细胞完整性和分子通路改变。结果：在30周龄时，未治疗对照组的糖尿病发病率为77%，aCD3单药治疗组为66%，GLP1-E2单药治疗组为61%。联合治疗显著降低糖尿病发病率至38%（p≤0.001），并延迟疾病发作6周，在治疗停止后持续保护5周。GLP1-E2单药治疗减少胰岛免疫细胞浸润的程度与aCD3单药及联合治疗相似，且不影响外周淋巴细胞计数。空间转录组学显示，在疾病进展过程中，与β细胞应激（Hspa5， Eif2ak3， Xbp1， Ddit3）、去分化（Cd81）、“非允许”基因（Oat， Igfbp4）、抗原呈递（H2-K1， H2-Q6， H2-Ab1， H2-Eb1）和炎症（Cxcl10， Cxcl9， Ccl5）相关的基因应答增加。这些过程被单药和联合治疗减弱，其中aCD3主要恢复β细胞身份，GLP1-E2减少β细胞应激和免疫原性。对17周龄治疗小鼠的CD81和TUNEL染色显示，其水平与12周龄正常血糖NOD小鼠相当，而在17周龄未治疗小鼠中则增加。这种减少的β细胞去分化和死亡与改善的β细胞保护以及26.5周时β细胞质量的更好保留相关，与初发（糖尿病）小鼠相比。结论/解释：低剂量aCD3或GLP1-E2单药治疗延缓了雌性NOD小鼠的糖尿病发病并保留了β细胞质量，而联合治疗提供了显著更优的保护。同时靶向免疫失调和β细胞脆弱性突显了联合治疗在1型糖尿病中增强和延长免疫治疗功效的潜力。