缺乏斯里兰卡不明原因慢性肾脏病(CKDu)病毒病因的证据

Lack of evidence for viral etiology in symptomatic chronic kidney disease of unknown etiology (CKDu) in Sri Lanka

作者信息Nilantha Pushpakumara, Paul Freund, Shakila Premarathne, Pasan Hewavitharane, Naduni Erandika, Dulanjali Herath, Thilini Weerakoon, Sulochana Wijethunga, Neelakanthi Ratnatunga, Abdul Wazil, Christopher M Skopnik, Diana Metzke, Julia Melchert, Tobias Bleicker, Kerstin Amman, Christoph Daniel, Victor M Corman, Terry C Jones, Sabrina Weiss, Kai-Uwe Eckardt, Philipp Enghard, Nishantha Nanayakkara
PMID41126074
发布时间2025-10-22
DOI10.1186/s12882-025-04527-z

实验完整度

包含前瞻性队列研究、血清病毒组学筛选、肾活检NGS和PAN-Hanta-PCR,但缺乏功能验证或机制验证,且样本量有限。

主要模型

发热综合征患者队列(85例) 肾活检组织(19例)

重点核对

患者队列:85例有症状患者(至少三种症状:关节痛、肌痛、发热、背痛或感觉不适) 血清样本32份,用于VirScan™病毒组学分析 肾活检19份,用于PAN-Hanta-PCR和NGS 随访时间:中位2.3年(范围0.8-3.3年) eGFR下降定义:每年下降≥4 ml/min/1.73m2

摘要

背景:不明原因慢性肾脏病(CKDu)是斯里兰卡的一个主要健康问题。在CKDu流行地区,已报道一种短暂的症状性发作,其特征为发热、排尿困难和关节痛,并伴有肾功能障碍。Sym-CKDu的组织学特征与急性间质性肾炎一致,被认为是CKDu的潜在起始事件。在各种可能的病因中,病毒感染如汉坦病毒、巨细胞病毒(CMV)和EB病毒(EBV)被认为与CKDu的发病有关。方法:在这里,我们对在斯里兰卡CKDu流行地区的门诊就诊、出现至少三种症状(即关节痛、肌痛、发热、背痛或感觉不适)的有症状患者进行了一项前瞻性观察性队列研究。2018年6月至2021年11月期间,共纳入151例在斯里兰卡CKDu流行地区门诊就诊的出现发热综合征的患者,其中85例患者回访。测定了血清肌酐、CRP、胱抑素C和试纸法蛋白尿。使用VirScan™-Pipeline筛选了32份血清样本中针对已知人类致病病毒的抗体。分析了19份肾活检组织中病毒病原体的存在,使用PAN-Hanta-PCR和下一代测序(NGS)。结果:初诊时eGFR降低的患病率很高,尤其是在男性中。中位随访2.3年后,16名患者每年eGFR下降≥4 ml/min/1.73m2,末次随访时eGFR<90 ml/min/1.73m2。eGFR下降的患者在地理上聚集。病毒组筛查未在eGFR下降组中鉴定出任何抗体反应性。对19份肾活检组织的NGS评估和汉坦病毒PCR未检测到病毒病原体。结论:在CKDu流行地区,相当比例的出现发热综合征的患者在随后几年出现了显著的eGFR下降。未发现病毒病因的证据。试验注册:不适用。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
在CKDu流行地区,出现发热综合征的患者中,病毒感染是否是肾损伤和eGFR下降的病因?
核心机制
未发现病毒感染的证据;研究不支持病毒作为启动因素或致病机制。
主要证据
基于32份血清的VirScan™病毒组学分析未显示病毒抗体反应性差异;19份肾活检NGS和PAN-Hanta-PCR未检测到病毒病原体。
研究意义
研究结果使病毒病因变得不太可能,支持CKDu可能表现为“冰山一角”现象,即大多数患者未被发现,少数出现症状。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

队列建立与基线评估

评估出现发热综合征的CKDu流行地区患者的基线肾功能和临床特征。

在斯里兰卡Girandurukotte地区,纳入151例有至少三种症状(关节痛、肌痛、发热、背痛或不适)的患者,收集血液和尿液样本,测定血清肌酐、CRP、胱抑素C和尿蛋白。

2

随访与eGFR轨迹分析

评估患者随访期间肾功能变化,并识别eGFR快速下降的患者。

对85例回访患者进行随访,中位随访2.3年,根据eGFR变化分组,计算eGFR斜率。

3

病毒组学筛查

检测患者血清中针对已知人类致病病毒的抗体,以寻找病毒病因线索。

对32份血清样本(7份来自eGFR下降组,25份对照)使用VirScan™-Pipeline进行噬菌体免疫沉淀测序(PhIP-Seq),分析病毒抗体反应性。

4

肾活检组织病毒检测

直接检测肾活检组织中是否存在病毒基因组,以确认或排除病毒病因。

对19份肾活检组织(4份来自队列,15份来自Sym-CKDu患者)进行RNA/DNA提取,使用PAN-Hanta-PCR检测汉坦病毒RNA,并构建DNA文库进行下一代测序(NGS)分析病毒序列。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
TissueLyser IIQiagen--
MagNA Pure 96系统Roche--
M-MLV反转录酶Thermo Fisher Scientific--
KAPA RNA HyperPrep试剂盒Roche Diagnostics--
Qubit dsDNA HS检测试剂盒Thermo Fisher Scientific--
Agilent TapeStation与HS D1000试剂盒Agilent--
NextSeq 500/550高输出试剂盒Illumina--
Jaffe法----
比浊法----

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
患者队列
纳入标准:年龄>18岁,至少三种症状(关节痛、肌痛、发热、背痛或不适);排除标准:已诊断CKDu或CKD
阅读提示:Methods: Participant recruitment and inclusion criteria
随访
随访时间:中位2.3年(范围0.8-3.3年);eGFR下降定义:每年≥4 ml/min/1.73m2
阅读提示:Results: Change of renal function over time in the follow-up
病毒组学分析
样本量:32份血清;分组:eGFR下降组(n=7)和对照组(n=25);方法:VirScan™-Pipeline
阅读提示:Methods: Virome data
肾活检分析
样本量:19份肾活检;检测:PAN-Hanta-PCR和NGS
阅读提示:Methods: RNA/DNA extraction and Hanta-PCR, High-throughput sequencing (HTS) and data analysis