导致花粉食物过敏综合征的GRP家族变应原Pru p 7与Cry j 7的结构与稳定性分析

Cry j 7是一种富含半胱氨酸、分子量为7 kDa的赤霉素调节蛋白（GRP），具有六个二硫键。本研究从日本柳杉中将其分离鉴定为花粉变应原。它与食物变应原（如桃中的Pru p 7）存在交叉反应，并导致花粉-食物过敏综合征（PFAS）。本研究成功利用毕赤酵母在高细胞密度发酵培养中过表达了重组Cry j 7和Pru p 7，并通过反相HPLC纯化得到纯蛋白。通过MS、CD和1H-NMR实验对Cry j 7和Pru p 7进行表征，确认了Cry j 7以及Pru p 7正确的天然构象。比较结果显示，与Pru p 7相比，Cry j 7的二硫键表现出优异的稳定性，并在不同pH缓冲液中可保持其原始结构直至90°C。值得注意的是，NMR分析表明，与Cry j 7相比，Pru p 7中S38-C47区域的α-螺旋和环区具有更高的灵活性。此外，我们的结果表明Cry j 7对酶消化的敏感性与Pru p 7不同：Cry j 7更容易被蛋白酶解，而Pru p 7在胃肠道中表现出更好的抵抗性。这些结构稳定性和蛋白酶解敏感性的差异为理解GRP家族内的致敏性提供了有价值的见解。