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嗜肺军团菌通过具有独特催化机制的效应蛋白维持宿主细胞泛素稳态
Legionella maintains host cell ubiquitin homeostasis by effectors with unique catalytic mechanisms
摘要
胞内细菌病原体嗜肺军团菌通过分泌具有多种生化活性的效应蛋白来调控宿主细胞功能。SidE家族效应蛋白通过产生磷酸核糖泛素干扰宿主蛋白泛素化。本研究发现，效应蛋白LnaB能将磷酸核糖泛素转化为ADP-核糖化泛素，后者可被(ADP-核糖基)水解酶MavL进一步加工为ADP-核糖和功能性泛素，从而在感染细胞内维持泛素稳态。LnaB在被肌动蛋白激活后，还会在酪氨酸残基上进行自我AMP酰化。LnaB的活性依赖于一个存在于多种细菌病原体毒素大家族中的Ser-His-Glu基序(SHxxxE)。因此，本研究阐明了病原体维持泛素稳态的机制，并鉴定了一个能够进行蛋白质AMP酰化的酶家族。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| Lipofectamine 3000 转染试剂 | Invitrogen | L3000150 |
| Flag特异性抗体包被的琼脂糖珠 | Sigma | F2426 |
| 蛋白G珠 | Cytiva | 17061801 |
| Flag肽溶液 | Sigma | F3290 |
| Olympus IX-83 荧光显微镜 | Olympus | -- |
| Ni2+-NTA 琼脂糖珠 | QIAGEN | -- |
| 谷胱甘肽琼脂糖珠 | Pierce | -- |
| Superdex 200 Increase 层析柱 | GE Healthcare | -- |
| Amicon 离心过滤器 | Millipore | -- |
| 低容量纳米等温滴定量热仪 | TA instrument | -- |
| 微量热仪 Affinity ITC | WatersTM | -- |
| Proteomelab XL-I 分析型超速离心机 | Beckman-Coulter | -- |
| 镍琼脂糖珠 | -- | -- |
| 硝酸纤维素膜 | Bio-Rad | 1620112 |
| Odyssey 红外成像系统 | Li-Cor’s Biosciences | -- |
| Dionex UltiMate 3000 RSLC 纳升系统 | Thermo Scientific | -- |
| Q Exactive™ HF 混合四极杆-Orbitrap 质谱仪 | Thermo Scientific | -- |
| 捕集柱 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| 反相色谱柱 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| 液相色谱-串联质谱系统 | -- | -- |