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编辑γ-珠蛋白抑制因子结合位点可恢复胎儿血红蛋白合成并纠正镰状细胞病表型
Editing a γ-globin repressor binding site restores fetal hemoglobin synthesis and corrects the sickle cell disease phenotype
摘要
镰状细胞病（SCD）是由成人血红蛋白β链中的单个氨基酸改变引起的，该改变导致血红蛋白聚合和红细胞镰状化。在成人生活中导致胎儿γ-珠蛋白产生的突变（遗传性胎儿血红蛋白持续存在症，HPFH）的共同遗传可降低SCD的临床严重程度。HBG γ-珠蛋白启动子中的HPFH突变破坏了抑制因子BCL11A和LRF的结合位点。我们使用CRISPR-Cas9通过在HBG启动子中产生插入和缺失来模拟HPFH突变，从而破坏已知和推定的抑制因子结合位点。对患者来源的造血干/祖细胞（HSPCs）中的LRF结合位点进行编辑，导致了γ-珠蛋白的去抑制和镰状表型的纠正。使用靶向LRF结合位点的gRNA处理的HSPCs的异种移植显示，在重新增殖的HSPCs中具有很高的编辑效率。本研究将LRF结合位点确定为SCD基因组编辑治疗的有效靶点。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| MA128质粒 | -- | -- |
| AutoMACS分选仪 | Miltenyi Biotec | -- |
| CD34微珠试剂盒 | Miltenyi Biotec | -- |
| P3原代细胞4D-Nucleofector X试剂盒S | Lonza | -- |
| P3原代细胞4D-Nucleofector X试剂盒L | Lonza | -- |
| PureLink基因组DNA小量提取试剂盒 | Life Technologies | -- |
| Quick-DNA/RNA小量提取试剂盒 | ZYMO Research | -- |
| DNA提取通用试剂盒 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| NexeraX2 SIL-30AC色谱仪 | Shimadzu | -- |
| 250 mm × 4.6 mm, 3.6微米Aeris Widepore色谱柱 | Phenomenex | -- |
| PolyCAT A色谱柱 | PolyLC | -- |
| AxioObserver Z1显微镜 | Zeiss | -- |
| Bioruptor Pico超声破碎系统 | Diagenode | -- |
| Viia7实时PCR系统 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| Gallios流式细胞仪 | Beckman Coulter | -- |
| Fortessa X20流式细胞仪 | BD Biosciences | -- |
| FACSAria II流式细胞分选仪 | BD Biosciences | -- |
| SH800细胞分选仪 | Sony Biotechnology | -- |
| Nucleofector II电转仪 | -- | -- |