患者队列构建和临床病理特征收集
收集肌层浸润性膀胱癌患者的肿瘤样本和临床病理数据,为后续分析提供基础
回顾性纳入2004年至2014年期间在慕尼黑大学泌尿外科接受根治性膀胱切除术的180例MIBC患者,排除接受新辅助治疗或既往膀胱内治疗的患者。由病理学家确认肿瘤组织学、分级和分期,并记录临床病理参数。
Ectonucleotidases CD39 and CD73 expression levels are independent and inverse predictors of survival in muscle-invasive bladder cancer
研究包含明确的患者队列、组织微阵列和免疫组织化学实验,并通过生存分析和多因素回归验证了CD39和CD73的预后价值。
180例肌层浸润性膀胱癌患者的肿瘤组织样本 组织微阵列
患者队列:180例肌层浸润性膀胱癌患者,接受根治性膀胱切除术 样本来源:福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)肿瘤标本,每例取3个1mm核心构建组织微阵列 检测方法:免疫组织化学,使用抗CD39抗体(克隆EPR26473-58,1:1000)和抗CD73抗体(克隆D7F9A,1:180) 评分方法:H-score,由三位病理学家独立评估,取三个核心的平均值 生存分析:Kaplan-Meier法和对数秩检验,多因素Cox回归调整年龄、pT分期和UICC分期
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
收集肌层浸润性膀胱癌患者的肿瘤样本和临床病理数据,为后续分析提供基础
回顾性纳入2004年至2014年期间在慕尼黑大学泌尿外科接受根治性膀胱切除术的180例MIBC患者,排除接受新辅助治疗或既往膀胱内治疗的患者。由病理学家确认肿瘤组织学、分级和分期,并记录临床病理参数。
利用组织微阵列技术,在单个石蜡块上同时分析多个肿瘤样本,提高免疫组织化学检测效率并减少异质性影响
从每个患者的FFPE肿瘤标本中提取3个1mm核心,代表不同的肿瘤区域,组装成新的TMA块。制备4μm厚的切片用于免疫组织化学分析。
检测MIBC样本中CD39和CD73蛋白在肿瘤细胞和基质细胞中的表达水平及定位
分别对CD39和CD73进行免疫组织化学染色。CD39使用兔单克隆抗体(1:1000),CD73使用兔单克隆抗体(1:180)。使用DAB作为色原,苏木精复染。
对CD39和CD73在肿瘤和基质细胞中的表达进行半定量评估,定义高表达和低表达分组
采用H-score方法,评估染色强度和阳性细胞百分比。H-score = Σ(强度评分×阳性细胞百分比)。三位病理学家独立评分,取平均值。以中位H-score作为阈值定义高/低表达。
评估CD39和CD73表达与患者生存结局的关联,并探讨其作为独立预后因素的潜力
使用Kaplan-Meier法和对数秩检验比较不同表达组的OS、TSS和DFS。通过Spearman秩相关分析表达与临床病理变量的相关性。构建多因素Cox回归模型调整年龄、pT和UICC分期,评估独立预后价值。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 免疫组织化学 | 抗人CD39抗体 | Abcam | ab300065 |
| 抗人CD73抗体 | Cell Signaling Technology | 13160 | |
| Q缓冲液EDTA | Quartett | BU-002-0120 | |
| ImmPRESS抗兔IgG聚合物试剂盒 | Vector Laboratories | MP-7401 | |
| Novocastra抗原修复液 | Leica Biosystems | RE7116 | |
| MACH 3兔HRP聚合物检测试剂盒 | BioCare | M3R531 | |
| DAB+ | Agilent Technologies | K3468 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 患者队列 | 患者纳入标准:180例MIBC患者,排除新辅助治疗和既往膀胱内治疗;样本来源:FFPE肿瘤组织;临床病理参数 阅读提示:Materials and methods, Patient cohort and sample details |
| 组织微阵列 | 核心直径1mm,每例3个核心,切片厚度4μm 阅读提示:Materials and methods, Tissue microarray construction |
| 免疫组织化学 | 抗体克隆、稀释度、抗原修复条件、检测试剂盒、显色系统 阅读提示:Materials and methods, Immunohistochemistry |
| H-score评分 | 评分者、强度分级、阳性细胞百分比、中位H-score阈值 阅读提示:Materials and methods, Semiquantitative analysis of ectonucleotidase expression |
| 生存分析 | OS、TSS、DFS定义,随访时长,删失处理,统计方法,调整因素 阅读提示:Materials and methods, Statistical analysis |