靶向血小板的自我扩增mRNA用于安全、长效的血栓预防

背景：血栓是心血管疾病发病率和死亡率的主要因素。尽管目前的抗血小板疗法减少了血栓并发症，但它们与全身性出血并发症相关。我们先前开发了一种单链可变片段，它能特异性结合并阻断活化的血小板整合素αIIbβ3，从而在不损害止血功能的情况下预防血栓形成。我们假设编码scFvαIIbβ3的基于mRNA的疗法将提供更长的表达时间和增强的治疗持久性，同时保持良好的安全性。 方法：我们设计并合成了编码scFvαIIbβ3的传统mRNA和自我扩增mRNA构建体。首先通过确认其功能性scFvαIIbβ3的表达在体外验证了这些构建体。对于体内实验，mRNA被封装在一种由γ-谷维素和DLin-KC2-DMA组成的新型脂质纳米颗粒配方中用于全身递送。通过一系列生化和组织学检查评估了其生物安全性。使用小鼠FeCl3诱导的动脉血栓模型来评估编码scFvαIIbβ3的mRNA对血栓形成的预防效果。 结果：体外实验证实了功能性scFvαIIbβ3的有效表达和分泌，该片段能选择性结合并阻断活化的GPIIb/IIIa，从而抑制血小板聚集。在诱导血栓形成的小鼠中，OryKL递送的scFvαIIbβ3 mRNA在治疗后24小时显著延长了血管闭塞时间，而自我扩增mRNA则提供了超过7天的持续血栓保护。所有组的尾出血时间均未改变，也未观察到全身毒性或组织病理学异常。 结论：我们的研究结果表明，scFvαIIbβ3 mRNA和自我扩增mRNA疗法能够在体内实现安全、有效和长效的抗血栓保护，为血栓预防提供了一种有前景的策略，避免了当前抗血小板疗法相关的出血风险。