建立ECRSwNP小鼠模型
通过鼻内给予OVA和AP诱导ECRSwNP模型,并缩短建模时间。
雄性BALB/c小鼠适应1周后,每周3次鼻内给予含75 μg OVA和AP(低剂量0.5 U或高剂量2 U)的20 μL PBS,持续6周或12周;对照组给予PBS。
Murine model of eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyposis inducing neuroinflammation and olfactory dysfunction
包含组织学、细胞因子检测、行为学、基因表达等多层级验证,并包含功能与机制验证。
BALB/c小鼠ECRSwNP模型 小鼠嗅球组织 小鼠鼻腔黏膜
OVA和AP的给药剂量(低剂量0.5 U,高剂量2 U) 给药时间(6周和12周) 小鼠品系(雄性BALB/c) 行为学测试类型(埋藏食物测试、嗅觉习惯化/去习惯化测试) 检测指标(OMP、MPO、细胞因子等)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
通过鼻内给予OVA和AP诱导ECRSwNP模型,并缩短建模时间。
雄性BALB/c小鼠适应1周后,每周3次鼻内给予含75 μg OVA和AP(低剂量0.5 U或高剂量2 U)的20 μL PBS,持续6周或12周;对照组给予PBS。
评估鼻窦黏膜炎症、息肉样病变及上皮厚度变化。
处死小鼠后取头,固定脱钙,石蜡切片,进行HE染色评估息肉样病变和上皮厚度,免疫组化检测BMK-13和MPO以计数嗜酸性粒细胞和中性粒细胞,OMP染色评估嗅觉上皮厚度。
检测鼻灌洗液中炎症细胞因子水平,反映鼻腔炎症状态。
麻醉后行气管切开,22G导管插入后鼻孔,用1 mL PBS灌洗鼻腔,收集灌洗液,离心后用多重免疫测定法检测IL-4、IL-5、IL-6、IL-13、IL-17A、eotaxin和TNF-α。
评估小鼠嗅觉功能,包括嗅觉敏感性和辨别能力。
在OVA/AP给药12周后,进行埋藏食物测试和嗅觉习惯化/去习惯化测试。埋藏食物测试:小鼠禁食20小时,记录找到并开始吃埋藏食物的潜伏期;暴露食物测试作为对照。嗅觉习惯化/去习惯化测试:依次呈现水、香蕉、杏仁和两种社会气味,记录每次嗅探时间。
检测嗅球中炎症标志物和神经元标志物的mRNA水平,评估神经炎症。
给药12周后,收集嗅球组织,提取总RNA,逆转录合成cDNA,RT-qPCR检测MCP-1、CD68、Iba1、TNF-α、IL-1β、iNOS、IFN-γ、OMP、GAP43、AC3和NeuN的相对表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物模型建立 | 卵清蛋白 | Sigma-Aldrich | -- |
| 组织学评估 | 抗嗜酸性粒细胞主要碱性蛋白抗体 | Novus Biologicals | NBP1-42140 |
| 嗜酸性粒细胞-肥大细胞染色试剂盒 | ScyTek Laboratories | -- | |
| 免疫组织化学 | 抗髓过氧化物酶抗体 | Elabscience | E-AB-70091 |
| 抗嗅觉标记蛋白抗体 | Abcam | ab183947 | |
| 细胞因子分析 | ProcartaPlex多重免疫测定 | Invitrogen | -- |
| 行为学测试 | 实验室可高压灭菌啮齿动物饲料5010 | LabDiet | -- |
| 基因表达分析 | SYBR green PCR预混液 | Vazyme Biotech | -- |
| 统计软件 | SPSS 17.0 | IBM | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | 小鼠品系(雄性BALB/c)、年龄、体重、给药剂量(OVA 75 μg,AP 0.5或2 U)、给药体积(20 μL)、给药频率(每周3次)、持续时间(6或12周) 阅读提示:Methods: Animals, Establishment of ECRSwNP model |
| 组织学评估 | 切片位置(眼前缘前部)、切片厚度(4 μm)、染色方法(HE、BMK-13、MPO、OMP)、息肉定义 阅读提示:Methods: Histologic evaluation, Fig 1-4 |
| 鼻灌洗液细胞因子分析 | 灌洗液体积(1 mL)、检测方法(ProcartaPlex多重免疫测定)、细胞因子种类 阅读提示:Methods: Nasal lavage fluid cytokine analysis |
| 行为学测试 | 埋藏食物测试的禁食时间(20小时)、潜伏期记录方法;嗅觉习惯化/去习惯化测试的气味种类、呈现次数和时长 阅读提示:Methods: Olfactory behavior test, Fig 6 |
| 嗅球基因表达分析 | 给药时间(12周)、嗅球组织收集、内参基因(GAPDH)、分析方法(2^-ΔΔCt) 阅读提示:Methods: Measurement of the mRNA of proinflammatory mediators and neuronal markers..., Fig 8 |