Cornuside Is a Potential Agent against Alzheimer's Disease via Orchestration of Reactive Astrocytes
研究包含体内3×Tg-AD小鼠模型和体外C6细胞实验，涉及行为学、病理染色、分子检测及机制验证（抑制剂和基因沉默），涵盖多个证据层级。
3×Tg-AD小鼠（APP/PS1/Tau三转基因AD模型） C6大鼠胶质瘤细胞 BV2小胶质细胞
野生型小鼠背景：C57BL/6J 山茱萸苷给药剂量：10 mg/kg和20 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续4周 体外实验中山茱萸苷浓度为10 μmol/L MCM制备：BV2细胞经2 μg/mL LPS处理24小时 PI3K抑制剂LY294002浓度：10 μM，预处理4小时
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估山茱萸苷对3×Tg-AD小鼠认知功能、病理改变及星形胶质细胞活化的影响。
将3×Tg-AD小鼠随机分为载体组和山茱萸苷低（10 mg/kg）、高（20 mg/kg）剂量组，WT小鼠作为对照组，腹腔注射给药4周。进行Morris水迷宫测试评估认知功能；采用硫黄素S染色、Nissl染色、免疫组化、免疫荧光双标、Western blot和ELISA检测Aβ斑块、Tau磷酸化、神经元形态、星形胶质细胞标记（GFAP、C3、S100A10）及炎症和氧化应激指标。
验证山茱萸苷对MCM诱导的C6细胞A1/A2表型转换的影响。
用LPS刺激BV2细胞制备MCM，处理C6细胞，并加入山茱萸苷（10 μmol/L），检测C3和S100A10 mRNA表达，以及炎症因子、氧化应激指标。
验证山茱萸苷对AKT/Nrf2/NF-κB信号通路的作用及依赖性。
在C6细胞中，使用PI3K抑制剂LY294002预处理，或转染Nrf2 siRNA，检测p-AKT、核Nrf2、IκB-α、p-NF-κB p65蛋白表达，以及A1/A2标记物和炎症、氧化应激指标。
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 药物处理 | 山茱萸苷 | 中国友好医院临床医学研究所 | 纯度≥98%，分子式C24H30O14 |
| ELISA检测 | 小鼠Aβ1-40 ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology | E-EL-M3009 |
| 小鼠Aβ1-42 ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology | E-EL-M3010 | |
| 小鼠IL-1β ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology | E-EL-M0037c | |
| 小鼠IL-6 ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology | E-EL-M2453c | |
| 小鼠TNF-α ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology | E-EL-M3063 | |
| 大鼠IL-1β ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology | E-EL-R0012c | |
| 大鼠IL-6 ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology | E-EL-R0896c | |
| 大鼠TNF-α ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology | E-EL-R2856c | |
| Western blot | 抗Tau（磷酸化Ser396）抗体 | Proteintech | ab32057 |
| 抗GFAP抗体 | Proteintech | 60190-1-Ig | |
| 抗C3抗体 | Proteintech | 21337-1-AP | |
| 抗S100A10抗体 | Proteintech | 11250-1-AP | |
| 抗iNOS抗体 | Proteintech | 18985-1-AP | |
| 抗PSD95抗体 | Proteintech | 20665-1-AP | |
| 抗Nrf2抗体 | Proteintech | 16396-1-AP | |
| 抗Histone-H3抗体 | Proteintech | 17168-1-AP | |
| 抗GAPDH抗体 | Proteintech | 60004-1-Ig | |
| 抗β-actin抗体 | Proteintech | 60004-1-Ig | |
| 免疫组化/免疫荧光 | 抗Iba1抗体 | FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation | 019-19741 |
| Western blot | 抗SYP抗体 | Boster Biological Technology | PB0462 |
| 抗p-NF-κB p65抗体 | Cell Signaling Technology | #3033 | |
| 抗p-AKT (Ser473)抗体 | Cell Signaling Technology | #4060 | |
| 抗AKT抗体 | Cell Signaling Technology | #4691 | |
| 抗IκB-α抗体 | Cell Signaling Technology | #4814 | |
| 抗NF-κB p65抗体 | Cell Signaling Technology | #8242 | |
| 山羊抗兔二抗 | Cell Signaling Technology | #7074 | |
| 山羊抗小鼠二抗 | Cell Signaling Technology | #7076 | |
| 细胞培养 | F12k培养基 | -- | -- |
| DMEM培养基 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| 胎牛血清 | Zeta Life, Inc. | -- | |
| 青霉素 | -- | -- | |
| 链霉素 | -- | -- | |
| 药物处理 | 脂多糖 | -- | -- |
| MCM制备 | 脂多糖 | -- | -- |
| RT-qPCR | TRIzol试剂 | Invitrogen | -- |
| 转录第一链cDNA合成试剂盒 | Vazyme | -- | |
| ChamQ通用SYBR Master Mix | Vazyme | -- | |
| 实时PCR系统（StepOnePlus） | Vazyme | -- | |
| NO检测 | 一氧化氮检测试剂盒 | Jiancheng Bioengineering Institute | -- |
| MDA检测 | 丙二醛检测试剂盒 | Jiancheng Bioengineering Institute | -- |
| GSH-Px检测 | 谷胱甘肽过氧化物酶比色法检测试剂盒 | Elabscience Biotechnology | -- |
| SOD检测 | 总超氧化物歧化酶比色法检测试剂盒 | Elabscience Biotechnology | -- |
| Western blot | BCA蛋白定量试剂盒 | Solarbio Science & Technology | -- |
| PVDF膜 | -- | -- | |
| Nissl染色 | 尼氏染液 | Beyotime Biotechnology | #C0117 |
| 免疫荧光 | DAPI | -- | -- |
| 抗荧光衰减封片剂 | Solarbio | -- | |
| 山羊抗小鼠IgG H&L（Alexa Fluor 555） | -- | -- | |
| 山羊抗兔IgG H&L（Alexa Fluor 488） | -- | -- | |
| 图像采集 | 奥林巴斯荧光显微镜（Olympus IX53） | Olympus | -- |
| 行为学数据采集 | ZS-001分析仪 | -- | -- |
| 蛋白定量 | Nanodrop-2000分光光度计 | -- | -- |
| 细胞培养 | C6细胞 | Saibai Kang Biotechnology Co., Ltd. | -- |
| BV2细胞 | Saibai Kang Biotechnology Co., Ltd. | -- | |
| 动物实验 | 3×Tg-AD小鼠 | Academy of Military Medical Sciences of China's Laboratory Animal Center | -- |
| 野生型（C57BL/6J）小鼠 | Sibeifu Biotechnology | -- | |
| 抑制剂处理 | LY294002 | -- | -- |
| 基因沉默 | Nrf2 siRNA | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物实验 | 小鼠品系、年龄、饲养条件、分组、给药剂量、给药途径和持续时间 阅读提示：2.2. Animals, 2.3. Experimental Design |
| Morris水迷宫 | 水池尺寸、水温、平台位置、训练次数、训练天数、探针测试时间 阅读提示：2.4. Morris Water Maze Test |
| 组织学染色 | 切片厚度、染色时间、试剂浓度（Thioflavin S、DAPI等） 阅读提示：2.6. Thioflavin S-Staining, 2.7. Immunohistochemical Staining, 2.8. Immunofluorescence Double Staining |
| 细胞培养 | 细胞系来源、培养基成分、血清浓度、培养条件 阅读提示：2.9. Cell Culture |
| MCM制备 | LPS浓度、处理时间 阅读提示：2.10. Preparation of MCM |
| 体外药物处理 | 山茱萸苷浓度、处理时间 阅读提示：3.8. Cornuside Regulated A1/A2 Phenotypic Switch of C6 Cells Induced by MCM |
| 机制验证 | LY294002浓度、预处理时间、Nrf2 siRNA转染浓度和时间 阅读提示：3.9. Cornuside Protected C6 Cells Induced by MCM via AKT/Nrf2/NF-κB |
| Western blot | 抗体稀释比例、蛋白上样量、封闭条件、孵育时间 阅读提示：2.15. Western Blot |
| RT-qPCR | 引物序列、内参基因、分析方法 阅读提示：2.11. Real-Time Quantitative PCR, Supplementary Table S1 |
| ELISA和氧化应激指标 | 试剂盒来源、检测波长、样品处理方法 阅读提示：2.12. ELISA, 2.13. NO Testing, 2.14. Measurement of MDA, SOD, and GSH-Px |
| 统计分析 | 统计方法（ANOVA、Kruskal-Wallis等）、显著性水平 阅读提示：2.16. Statistical Analysis |
