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YTHDC1-m6A-GADD45B轴通过抑制p53/p21信号通路促进人牙周膜干细胞的软骨分化
The YTHDC1-m6A-GADD45B axis promotes chondrogenesis of hPDLSCs via suppressing senescence through p53/p21 signalling pathway
摘要
颞下颌关节骨关节炎（TMJOA）是一种治疗选择有限的退行性疾病。基于干细胞的组织工程，特别是利用人牙周膜干细胞（hPDLSCs），代表了软骨再生的一种有前景的方法。然而，我们先前已证明TMJOA微环境中的慢性炎症和缺氧应激显著加速了hPDLSCs的细胞衰老，严重损害了其再生潜力。本研究鉴定出YTHDC1-m6A-GADD45B轴是hPDLSCs衰老和软骨分化的关键调节因子。我们发现，在炎症和衰老条件下，m6A阅读蛋白YTHDC1表达下调。功能研究表明，过表达YTHDC1可减轻衰老并增强软骨分化，而其敲低则加剧衰老并抑制分化。机制上，YTHDC1识别GADD45B mRNA上的m6A修饰并促进其降解，从而抑制p53/p21信号通路。突变GADD45B的m6A位点可消除YTHDC1的调节作用。在TMJOA大鼠模型中，移植过表达YTHDC1的hPDLSCs改善了疾病表型，而共表达野生型GADD45B则逆转了此效应。我们的发现揭示了一种调控hPDLSCs衰老并进而影响软骨分化的新表观转录组机制，并突显了靶向YTHDC1-GADD45B-p53/p21轴的治疗潜力。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| I型胶原酶 | Sigma | -- |
| α-MEM培养基 | -- | -- |
| 胎牛血清 | -- | -- |
| II型胶原酶 | -- | -- |
| 杜氏改良Eagle培养基/F-12 | -- | -- |
| TRIzol试剂 | Invitrogen | -- |
| NanoDrop分光光度计 | -- | -- |
| PrimeScript逆转录试剂盒 | Takara | -- |
| TB Green预混液 | Takara | -- |
| QuantStudio 5系统 | -- | QuantStudio 5 |
| RIPA裂解液 | -- | -- |
| 蛋白酶和磷酸酶抑制剂 | Beyotime | -- |
| BCA检测试剂盒 | Thermo Fisher | -- |
| PVDF膜 | Millipore | -- |
| ECL检测系统 | Bio-Rad | -- |
| 软骨诱导培养基 | Cyagen | -- |
| 诱导试剂盒 | Cyagen | -- |
| 柠檬酸盐缓冲液 | -- | -- |
| 3%过氧化氢 | -- | -- |
| 正常山羊血清 | -- | -- |
| HRP标记的二抗 | -- | -- |
| DAB显色剂 | -- | -- |
| ImageJ (Fiji) | -- | -- |
| 慢病毒载体 | Heyuan | -- |
| 6孔板 | -- | -- |
| 聚凝胺 | Sigma-Aldrich | -- |
| 小干扰RNA | Heyuan | -- |
| Lipofectamine 3000转染试剂 | Invitrogen | -- |
| Opti-MEM减血清培养基 | Gibco | -- |
| 生物素化GADD45B RNA探针 | -- | -- |
| 链霉亲和素磁珠 | -- | -- |
| Magna RIP™ RNA结合蛋白免疫共沉淀试剂盒 | Millipore | -- |
| 磁珠 | -- | -- |
| 抗m6A抗体 | Synaptic Systems | -- |
| 蛋白A/G磁珠 | -- | -- |
| 定制正畸矫治器 | -- | -- |
| 磷酸盐缓冲液 | -- | -- |
| 高分辨率微型CT系统 | SCANCO Medical | -- |
| 光学显微镜 | Nikon | -- |