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转录的超保守非编码RNA uc.285+通过直接结合mRNA和蛋白质双重靶向CDC42促进结直肠癌增殖
A transcribed ultraconserved noncoding RNA, uc.285+, promotes colorectal cancer proliferation through dual targeting of CDC42 by directly binding mRNA and protein
摘要
转录的超保守区域（T-UCR）属于一种新型长链非编码RNA，在大鼠、小鼠和人类基因组的同源区域中高度保守。大量研究表明，T-UCRs的差异表达可以影响多种癌症的发展，揭示了T-UCRs作为新治疗靶点或潜在癌症生物标志物的能力。大多数关于T-UCRs在癌症中分子机制的研究都集中在ceRNA调控网络和与靶蛋白的相互作用上，但本研究揭示了一种创新的双重靶向调控方式，即T-UCRs直接结合mRNA并直接结合蛋白质。我们通过全基因组T-UCR基因微阵列筛选了可能与结直肠癌（CRC）相关的T-UCRs，并进一步研究了T-UCR uc.285+在CRC发展中的功能机制。调控uc.285+影响了CRC细胞系的增殖并影响了CDC42基因的表达。我们还发现，uc.285+通过直接结合CDC42 mRNA并增强其稳定性，同时直接结合CDC42蛋白并影响其稳定性，从而促进CRC细胞的增殖。简而言之，我们对细胞增殖特征的研究发现，uc.285+具有促进CRC增殖的生物学功能。uc.285+可能作为CRC的新型诊断生物标志物具有相当大的潜力。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| EdU检测试剂盒 | Ruibo | -- |
| RNA反义纯化试剂盒 | BersinBio | Bes5103-3 |
| Cell Titer-Glo 2.0细胞活力检测试剂盒 | Promega | -- |
| GoTaq® qPCR试剂盒 | Promega | A6002 |
| 逆转录试剂盒 | Promega | A6001 |
| RNA下拉试剂盒 | BersinBio | -- |
| CCK-8试剂 | Dojindo | CK04 |
| CDC42抗体 | Cell Signaling Technology | 2462 |
| CDC42抗体 | Signalway Antibody | 49282 |
| 微管蛋白抗体 | Abway | AB0012 |
| 微管蛋白抗体 | Servicebio | GB11017 |
| 增强化学荧光底物 | GE Healthcare | RPN5787 |
| TRIzol试剂 | Thermo Fisher Scientific | 15596018 |
| FITC凋亡检测试剂盒 | KGI | KGA107 |
| 蛋白酶K | Sangon Biotech | -- |
| Act D | Epicenter Biotech | -- |
| 绿色荧光核酸染料（10000×） | Solarbio | -- |
| DMEM: F12培养基 | ATCC | 302006 |
| 胎牛血清 | Gibco | 1750114 |
| RPMI-1640培养基 | Gibco | 61870036 |
| M5a培养基 | Gibco | 16600082 |
| 青霉素-链霉素溶液 | Servicebio | G4003 |
| 质粒制备、提取试剂盒 | QIAGEN | 12145 |
| riboFECT CP转染试剂盒 | Ruibo | C105511 |
| EdU检测试剂盒 | Ruibo | C10310 |
| 流式细胞周期检测试剂盒 | KGI | KGA511 |
| 双荧光素酶报告基因检测系统 | Promega | E1901 |
| RIP试剂盒 | IEMed | -- |
| BioDrop微量分析仪 | -- | -- |
| Typhoon FLA 7000成像仪 | GE Healthcare | -- |
| Clinx S6系统 | Clinx | ChemiScopeS6 |
| 荧光显微镜 | -- | -- |
| 共聚焦显微镜 | -- | -- |
| 酶标仪 | -- | -- |
| 培养箱 | -- | -- |
| 离心机 | -- | -- |
| 移液器 | -- | -- |