建立MCT诱导的PAH大鼠模型并分组给药
建立PAH模型并评估药物干预对PAH发展的影响。
雄性SD大鼠随机分为六组：对照组、MCT组、MCT+vehicle组、MCT+thiostrepton组、MCT+Y15组、MCT+CQ组。通过单次腹腔注射MCT（60mg/kg）建立PAH模型，2周后予以thiostrepton（20mg/kg）、Y15（15mg/kg）或CQ（40mg/kg）每日腹腔注射，共2周。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
通过FOXM1介导的FAK磷酸化激活自噬诱导野百合碱诱导的肺动脉高压
Activation of Autophagy Induces Monocrotaline-Induced Pulmonary Arterial Hypertension by FOXM1-Mediated FAK Phosphorylation
实验完整度
中文献包含体内大鼠模型、蛋白表达及功能验证，但缺乏体外细胞实验及分子机制的直接验证，如FOXM1对FAK的直接调控未证实。
主要模型
雄性SD大鼠野百合碱诱导PAH模型
重点核对
大鼠品系为雄性SD大鼠，体重200-250g MCT剂量为60mg/kg单次腹腔注射 FOXM1抑制剂thiostrepton剂量为20mg/kg，每日腹腔注射2周 FAK抑制剂Y15剂量为15mg/kg，每日腹腔注射 自噬抑制剂CQ剂量为40mg/kg，每日腹腔注射
摘要
目的：已有研究表明自噬的激活促进肺动脉高压（PAH）的发展。同时，叉头框M1（FOXM1）已被发现在几种类型的癌症中诱导自噬。然而，FOXM1是否在PAH中介导自噬激活仍不清楚，且这些过程的详细机制尚不明确。方法：通过给大鼠单次腹腔注射野百合碱（MCT）诱导PAH。测量右心室收缩压（RVSP）、右心室肥厚指数（RVHI）、中膜厚度百分比（%MT），并进行α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）染色和Ki67染色以评估PAH的发展。通过免疫印迹或免疫组织化学检测FOXM1、磷酸化粘着斑激酶（p-FAK）、FAK和LC3B的蛋白水平。结果：在MCT诱导的PAH大鼠中，FOXM1蛋白水平和FAK活性显著增加，并伴有自噬激活。药理学抑制FOXM1或FAK可抑制MCT诱导的自噬激活，降低MCT诱导的PAH大鼠的RVSP、RVHI和%MT，并抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖和肺血管肌化。结论：FOXM1通过诱导FAK磷酸化及随后的自噬激活促进MCT处理大鼠PAH的发展。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- FOXM1是否通过FAK磷酸化激活自噬，从而促进野百合碱诱导的肺动脉高压的发展？
- 核心机制
- FOXM1通过增加FAK的磷酸化，随后激活自噬，从而促进肺动脉高压的发展。
- 主要证据
- MCT诱导的PAH大鼠中FOXM1蛋白水平和FAK活性增加，伴随自噬激活；抑制FOXM1（thiostrepton）或FAK（Y15）降低自噬水平，并减轻RVSP、RVHI、%MT、PASMC增殖和肺血管肌化。
- 研究意义
- 该研究可能有助于开发更有效的PAH治疗策略。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估PAH发展指标
检测PAH的严重程度。
测量右心室收缩压（RVSP）和右心室肥厚指数（RVHI），并进行肺组织HE染色评估中膜厚度百分比（%MT）、α-SMA免疫组化评估肺血管肌化、Ki67免疫组化评估PASMC增殖。
检测自噬水平
验证MCT诱导的PAH中自噬是否被激活。
通过免疫印迹检测肺组织LC3B蛋白水平及LC3B-II/LC3B-I比值，通过免疫组化检测LC3B阳性PASMC百分比。
检测FAK活性
评估MCT诱导的PAH中FAK的磷酸化水平。
通过免疫印迹检测肺组织中p-FAK和FAK蛋白水平。
检测FOXM1表达
验证FOXM1在MCT诱导的PAH中的表达变化。
通过免疫印迹检测肺组织中FOXM1蛋白水平。
抑制FOXM1后的效应检测
验证抑制FOXM1能否减缓PAH发展并影响FAK和自噬。
给予FOXM1抑制剂thiostrepton后，检测RVSP、RVHI、%MT、α-SMA、Ki67、p-FAK、LC3B水平。
抑制FAK后的效应检测
验证抑制FAK能否减缓PAH发展并抑制自噬。
给予FAK抑制剂Y15后，检测RVSP、RVHI、%MT、α-SMA、Ki67、LC3B水平。
抑制自噬后的效应检测
验证抑制自噬能否减缓PAH发展。
给予自噬抑制剂CQ后，检测RVSP、RVHI、%MT、α-SMA、Ki67、LC3B水平。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物模型建立 | 野百合碱 | Sigma-Aldrich | -- |
| 药物处理 | 硫链丝菌素 | Selleckchem | -- |
| Y15 | Selleckchem | -- | |
| 磷酸氯喹 | Aladdin Bio-Chem Technology Co., Shanghai, China | -- | |
| 免疫组织化学 | 抗α-SMA抗体 | Boster | BM0002 |
| 抗Ki67抗体 | Immunoway | YM3064 | |
| 抗LC3B抗体 | Proteintech | 18725-1-AP | |
| 蛋白质印迹 | RIPA裂解液 | HEART | -- |
| BCA蛋白定量试剂盒 | Pierce | -- | |
| PVDF膜 | Bio-Rad | -- | |
| 抗β-actin抗体 | Immunoway | YM3028 | |
| 抗FOXM1抗体 | Signalway Antibody | 32671 | |
| 抗p-FAK抗体 | Santa Cruz | sc-374668 | |
| 抗FAK抗体 | Proteintech | 12636-1-AP | |
| HRP标记的山羊抗兔IgG | Sigma-Aldrich | AP156P | |
| HRP标记的山羊抗小鼠IgG | Sigma-Aldrich | AP127P | |
| 增强化学发光检测系统 | Amersham Bioscience | -- | |
| Quality One软件 | Bio-Rad | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | 大鼠品系、性别、体重、MCT剂量及给药方式 阅读提示：Materials and Methods: Animals, Generation of PAH Models and Drug Treatment |
| 药物处理 | thiostrepton、Y15、CQ的剂量、给药方式、给药时间 阅读提示：Materials and Methods: Generation of PAH Models and Drug Treatment |
| 血流动力学及形态学评估 | RVSP测量方法、RVHI计算、%MT计算方法、血管直径范围、样本量 阅读提示：Materials and Methods: Measurement of RVSP and RVHI, Histologic Analysis |
| 免疫组化 | 抗体品牌、货号、稀释比、切片厚度、观察血管直径及数量 阅读提示：Materials and Methods: Immunohistochemistry |
| 蛋白质印迹 | 抗体品牌、货号、稀释比、蛋白上样量、凝胶浓度、检测系统 阅读提示：Materials and Methods: Western Blot Analysis |