可开关适配体信标探针的系统性功能筛选

使用抗体和适配体等亲和结合剂的免疫测定对分子生物学至关重要。然而，基于这些亲和探针的分析方法的发展常常受到复杂操作步骤的阻碍，这些步骤可能引入误差，尤其是在细胞内环境和微流控系统等复杂环境中。开发用于免洗检测的分子探针（在检测到靶标时激活信号）的兴趣日益增长。在此，我们报道了一种用于可开关适配体信标探针的系统性功能筛选平台，该平台可实现靶标响应性检测。我们在微珠上构建了一个茎环、发夹状的信标库，并使用靶标响应性荧光激活分选进行筛选。所选出的适配体信标表现出强亲和力，仅在结合时触发荧光，从而实现了用于检测细胞内和膜蛋白的免洗免疫测定。计算建模为适配体结合和结构转换机制提供了见解，揭示了特定的蛋白质-适配体相互作用如何驱动茎环解旋以及结合后的构象变化，这些变化对于功能激活至关重要。该方法为生成可开关的适配体工具建立了一个标准化平台，支持其在先进诊断和研究中的潜力。