Spi1通过调节Clec7a介导的神经炎症和小胶质细胞吞噬作用加重神经病理性疼痛

背景：小胶质细胞在介导神经损伤反应中至关重要，神经炎症和对中间神经元抑制性突触的吞噬作用可增强神经元兴奋性和疼痛超敏反应。Spi1是中枢神经系统中小胶质细胞稳态的主要调节因子。然而，其在神经病理性疼痛中的功能仍不清楚。本研究旨在探讨Spi1对神经病理性疼痛的影响及其潜在机制。方法：RNA-seq分析确定Spi1是神经病理性疼痛中的一个中心枢纽基因。采用 spared nerve injury (SNI) 小鼠和 LPS 诱导的 BV2 细胞检测 Spi1 的表达。沉默 Spi1 以确定其在 SNI 进展中的作用。分别使用 von Frey 纤维丝和热板评估机械性异常性疼痛和热异常性疼痛。通过 western blot、免疫荧光或 qPCR 检测促炎标志物 CD86、抗炎标志物 CD206 以及炎症细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）的表达。此外，通过免疫荧光检测小胶质细胞形态变化、CD68 或 VGAT 在小胶质细胞中的体积，以反映小胶质细胞活化和吞噬作用。采用膜片钳评估神经元兴奋性。通过荧光素酶实验和 ChIP-qPCR 确定 Spi1 与 Clec7a 启动子的结合。随后，在体内和体外进行拯救实验，以阐明 Spi1 是否通过 Clec7a 发挥作用。结果：在 SNI 小鼠脊髓和 LPS 刺激的 BV2 细胞中观察到 Spi1 表达升高。Spi1 敲低减轻了 SNI 诱导的机械性和热异常性疼痛，减少了炎症细胞因子的释放和促炎标志物 CD86 的表达，降低了小胶质细胞中 CD68 或 VGAT 的体积，并增加了神经元自发性抑制性突触后电流（sIPSCs）的频率。机制上，通过荧光素酶实验和 ChIP-PCR 发现 Spi1 与 Clec7a 的启动子结合。体内和体外拯救实验表明，Spi1 通过 Clec7a 加重疼痛超敏反应、促进神经炎症并增强小胶质细胞吞噬作用。结论：我们的结果强调 Spi1-Clec7a 轴是神经病理性疼痛的关键因素，通过促进神经炎症和小胶质细胞吞噬作用，从而表明其是缓解神经病理性疼痛的一个有前景的治疗靶点。